Método clássico: reação de conglutinação
Antes de realizar a análise, é necessário conhecer o grupo sanguíneo do paciente pelo sistema AB0. Para o exame, utilizam-se duas séries diferentes de soros anti-Rh, que sejam compatíveis com o grupo sanguíneo em estudo.
O procedimento é realizado em uma placa de Petri:
- Na primeira linha, aplicam-se três gotas de soro de uma série; na segunda, o soro da outra série.
- Adiciona-se o sangue em estudo (proporção de soro para sangue de 10:1 ou 5:1).
- Como controle de atividade, adicionam-se eritrócitos padrão Rh+.
- Para o controle de especificidade, adicionam-se eritrócitos padrão Rh-.
- As gotas são misturadas cuidadosamente, cobertas com uma tampa e colocadas em banho-maria a uma temperatura de 46–48 °C por 10 minutos.
Avaliação dos resultados
Primeiro, avaliam-se as amostras de controle: a aglutinação deve ocorrer com os eritrócitos positivos e estar ausente com os negativos.
Interpretação dos resultados da amostra de sangue do paciente:
- Se houver aglutinação em ambas as séries de soros, o sangue é considerado Rh positivo (Rh+).
- Se não houver aglutinação dos eritrócitos, o sangue é Rh negativo (Rh-).
Importante: ao contrário da determinação do grupo AB0, na avaliação do fator Rh é categoricamente proibido adicionar solução fisiológica durante a reação, pois isso pode gerar um resultado falso-negativo.
Erros comuns no exame
A distorção dos resultados pode ser decorrente de falhas na técnica de execução:
- Uso de soros anti-Rh com atividade reduzida.
- Proporção incorreta entre os volumes de soro e sangue.
- Violação do regime de temperatura (aquecimento insuficiente ou excessivo).
- Redução do tempo de incubação (menos de 10 minutos).
- Adição de solução de NaCl durante a reação de conglutinação.
- Ignorar as amostras de controle de atividade e especificidade.
- Incompatibilidade de grupo dos reagentes utilizados.
Método rápido de determinação
Este método é utilizado em casos de emergência e não requer aquecimento. Utiliza-se soro anti-Rh do grupo IV(AB), diluído em solução de albumina (20–30%) ou dextrana (30–33%). O meio coloidal promove a aglutinação dos eritrócitos à temperatura ambiente.
Próximo à gota do reagente, aplica-se soro controle Rh- negativo sem anticorpos. Adiciona-se o sangue em estudo (em quantidade 2 a 3 vezes menor que a do soro), mistura-se por 3 a 4 minutos. Em seguida, adiciona-se uma gota de soro fisiológico e, após 5 minutos, avalia-se o resultado.
Se a reação for duvidosa (aglutinação em ambas as gotas) ou se for impossível determinar o fator Rh, deve-se utilizar exclusivamente sangue Rh negativo em transfusões de emergência.
Questões de aulas e exames
Por que não se deve adicionar solução fisiológica no método clássico?
A adição de solução isotônica de cloreto de sódio interfere na reação de conglutinação e pode levar a um resultado falso-negativo.
Para que serve a solução de dextrana ou albumina no método rápido?
O meio coloidal dessas soluções favorece a aglutinação dos eritrócitos sem a necessidade de banho-maria.
O que fazer em transfusões de emergência se o resultado for duvidoso?
Nessa situação, transfundir apenas sangue Rh negativo. Em último caso, permite-se a transfusão de sangue Rh+, mas estritamente após o teste de compatibilidade individual.
O que mais estudar sobre o tema
- Mecanismo da reação de conglutinação
- Causas de falso-aglutinação
- Propriedades dos meios coloidais (dextrana e albumina)
- Teste de compatibilidade do fator Rh antes da hemotransfusão
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