Aglutinação não detetada (resultado falso-negativo)
O resultado falso-negativo representa uma situação perigosa em que ocorre a interação real entre antigénios e anticorpos, mas visualmente esta não é absolutamente detetada. Como resultado, o médico pode tirar uma conclusão incorreta sobre o grupo sanguíneo do paciente.
Existem várias causas fundamentais para este fenómeno:
- Qualidade dos reagentes e biomaterial. O soro padrão utilizado pode apresentar uma atividade demasiado fraca, ou os próprios eritrócitos em estudo diferem por uma aglutinabilidade inicial baixa (capacidade de aglutinação).
- Violação das proporções. Um dos erros mais frequentes é o excesso de sangue em estudo em relação à quantidade de soro padrão na lâmina de vidro ou na placa.
- Influência do microclima. Se a sala estiver demasiado quente, a reação pode abrandar criticamente e não se manifestar a tempo.
Para uma profilaxia fiável de reações falso-negativas, é necessário controlar rigorosamente o curso do estudo. Apenas devem ser utilizados no trabalho soros ativos que possuam um título elevado. A regra mais importante é cumprir rigorosamente a proporção dos componentes: a gota de sangue deve relacionar-se com a gota de soro como 1:5 ou mesmo 1:10. Além disso, a temperatura ambiente não deve exceder 25 °C, e a avaliação final da imagem na placa pode ser realizada apenas após decorridos os 5 minutos previstos.
Falsa aglutinação (resultado falso-positivo)
O segundo grupo de erros metodológicos está associado ao aparecimento de aglutinação fictícia. Neste caso, não existe uma verdadeira reação imunológica, no entanto, o quadro visual cria a ilusão completa da presença de aglutinação.
Tais artefatos surgem por duas principais razões:
- Pseudoaglutinação. Com a permanência prolongada ao ar, a gota começa a secar. Este é um processo físico que faz com que os eritrócitos se disponham em estruturas características que lembram visualmente pilhas de moedas densas.
- Aglutinação pelo frio. Este efeito é provocado pela violação do regime de temperatura para baixo, quando o estudo é realizado em condições frias (a uma temperatura ambiente inferior a 15 °C).
A profilaxia de falsos positivos requer atenção às condições ambientais. Primeiro, todas as manipulações devem ser realizadas exclusivamente numa sala quente, onde a temperatura se mantenha estavelmente acima de 15 °C. Segundo, se o investigador suspeitar de secagem e da formação de pilhas de moedas, existe um método simples de verificação. Deve adicionar-se uma pequena quantidade de solução isotónica padrão de cloreto de sódio (Natrii chloridum) à gota duvidosa. No caso de uma reação falsa, os aglomerados de eritrócitos desfazem-se rapidamente, enquanto na verdadeira permanecem inalterados.
Conduta em casos duvidosos
Mesmo com a observância mais escrupulosa de todas as recomendações metodológicas, podem surgir imagens controversas na prática clínica. Se os resultados parecerem atípicos, pouco claros ou causarem a mínima dúvida no especialista, é estritamente proibido emitir um parecer definitivo.
Em tais situações duvidosas, o protocolo exige a execução dos seguintes passos:
- Substituição de reagentes. É necessário realizar um estudo repetido e duplicado, mas desta vez utilizando soros padrão de séries completamente diferentes. Isto permite excluir a influência de defeitos locais de um lote específico de reagentes.
- Mudança de metodologia. Como argumento decisivo, deve aplicar-se o método da reação cruzada. Este pressupõe a utilização não só de soros padrão, mas também de eritrócitos padrão, o que garante um controlo duplo e a máxima fiabilidade do resultado.
Resumo: perguntas e respostas sobre o tema
Que eritrócitos padrão específicos são utilizados para o método cruzado de determinação do grupo sanguíneo?
Para o método cruzado de determinação do grupo sanguíneo, utilizam-se eritrócitos padrão lavados de grupos conhecidos (I, II, III). Durante o estudo, uma gota destes eritrócitos é adicionada ao soro do paciente numa proporção em que a gota de eritrócitos é 5 vezes menor do que a gota de soro. A avaliação do resultado é realizada no total 5 minutos após a mistura e a adição da solução isotónica de cloreto de sódio.
Quais são os requisitos específicos de título exigidos aos soros padrão?
Exige-se aos soros padrão a presença de um título de pelo menos 1:32. Para a profilaxia de resultados falso-negativos (aglutinação não detetada), é necessário utilizar soros ativos com um título elevado. Ao mesmo tempo, os primeiros sinais de aglutinação de eritrócitos devem aparecer o mais tardar em 30 segundos. Uma condição obrigatória é a presença de um rótulo-passaporte com a indicação do título, sem o qual a utilização do reagente é estritamente proibida.
Quais aglutinogénios e aglutininas são detetados pelo método cruzado?
No método cruzado (com a ajuda de eritrócitos padrão), são detetados anticorpos no soro do paciente — as aglutininas $\alpha$ e $\beta$. Dependendo do grupo sanguíneo, são determinadas as seguintes aglutininas:
- Grupo I(0) — contém as aglutininas $\alpha$ e $\beta$.
- Grupo II(A) — contém a aglutinina $\beta$.
- Grupo III(B) — contém a aglutinina $\alpha$.
- Grupo IV(AB) — não contém aglutininas.
Informações sobre a deteção de aglutinogénios (antigénios A e B) diretamente no âmbito da descrição do método cruzado não são apresentadas nas fontes.
A regra de temperatura para o estudo: "Quinze — frio (falso positivo), vinte e cinco — quente (falso negativo)".
Questões de aulas e exames
Porque surge um resultado falso-negativo a uma temperatura normal?
Mais frequentemente, a culpa é do excesso de sangue em estudo em relação ao soro (violação da proporção de 1:5–1:10), ou da utilização de um reagente com atividade fraca.
Como distinguir a verdadeira aglutinação das "pilhas de moedas"?
É necessário adicionar um pouco de solução isotónica de NaCl à gota duvidosa. A pseudoaglutinação ("pilhas de moedas") desfaz-se após isto, e a verdadeira aglutinação persistirá.
O que fazer se, após adicionar soro fisiológico, o resultado continuar a não ser claro?
É obrigatório realizar um estudo repetido com soros de outras séries, bem como utilizar o método da reação cruzada com eritrócitos padrão.
O que mais estudar sobre o tema
- O mecanismo de formação de "pilhas de moedas" e a física da pseudoaglutinação
- Algoritmo detalhado para a realização do método de reação cruzada
- Causas da baixa aglutinabilidade dos eritrócitos em pacientes
- Bases imunológicas do desenvolvimento da aglutinação pelo frio
- Critérios para avaliar a atividade, o título e a adequação dos soros padrão
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