Natureza e propriedades dos tzoliclones
Os tzoliclones anti-A e anti-B são utilizados na cirurgia e na transfusão em substituição aos soros isohemaglutinantes padrão. Por sua natureza, são anticorpos monoclonais pertencentes à classe IgM.
Eles são produzidos por células especiais chamadas hibridomas. O hibridoma é o resultado da fusão de linfócitos B murinos (que produzem anticorpos) com células de mieloma murino. O reagente pronto é um líquido ascítico diluído obtido de camundongos portadores desses hibridomas.
A principal vantagem dos tzoliclones reside no fato de proporcionarem uma reação de aglutinação mais rápida e pronunciada. Os preparados são comercializados na forma líquida (em frascos ou ampolas), sendo o anti-A corado em vermelho e o anti-B em azul. Os reagentes devem ser armazenados em geladeira a uma temperatura de 2 a 8 °C, com prazo de validade de 2 anos.
Técnica de realização do exame
Para obter resultados confiáveis, é necessário seguir estritamente a metodologia. A reação é realizada a uma temperatura ambiente de 15 a 25 °C. Utiliza-se como superfície de trabalho uma placa de porcelana branca ou uma placa marcada.
Algoritmo passo a passo:
- Na superfície preparada, aplicam-se uma gota grande de tzoliclone anti-A e uma de anti-B.
- Próximo a cada gota de reagente, aplica-se o sangue em estudo. O volume da gota de sangue deve ser 10 vezes menor do que o volume da gota de tzoliclone.
- Com o auxílio de bastonetes de vidro separados (ou cantos de lâminas de microscopia), as gotas são misturadas delicadamente.
- A placa é balançada levemente para uma melhor interação dos componentes.
Visualmente, a reação geralmente começa a aparecer já nos primeiros 3 a 5 segundos. Em casos positivos, formam-se pequenos agregados vermelhos de eritrócitos, que rapidamente evoluem para flocos grandes. A observação final do processo e a avaliação definitiva são realizadas em até 2,5 minutos.
Interpretação dos resultados
A avaliação do grupo sanguíneo pelo sistema AB0 baseia-se na presença (+) ou ausência (–) de aglutinação dos eritrócitos com um tzoliclone específico. São possíveis quatro cenários:
- Grupo I (0): reação ausente com ambos os tzoliclones — anti-A (–) e anti-B (–). Conclusão: os eritrócitos não possuem aglutinogênios A e B.
- Grupo II (A): aglutinação observada apenas com anti-A (+) e ausente com anti-B (–). Conclusão: os eritrócitos contêm o aglutinogênio A.
- Grupo III (B): aglutinação ausente com anti-A (–) e observada com anti-B (+). Conclusão: os eritrócitos contêm o aglutinogênio B.
- Grupo IV (AB): reação de aglutinação ocorre com ambos os tzoliclones — anti-A (+) e anti-B (+). Conclusão: os eritrócitos contêm ambos os aglutinogênios A e B.
Controle adicional para o grupo IV (AB)
Se o exame revelar uma reação positiva com ambos os reagentes, atribui-se preliminarmente o grupo sanguíneo IV (AB). Contudo, este resultado requer confirmação obrigatória para excluir o fenômeno de aglutinação não específica.
Para o controle, utiliza-se solução isotônica de cloreto de sódio (NaCl). Aplica-se na placa uma gota grande (0,1 mL) de soro fisiológico e mistura-se com uma gota pequena (0,01 mL) do sangue em estudo. Se houver ausência de aglutinação nesta gota de controle, a veracidade do grupo sanguíneo IV é confirmada.
Nota: Se em qualquer etapa do exame surgir uma aglutinação duvidosa, o método com tzoliclones é complementado pelo método clássico com o uso de eritrócitos padrão.
Resumo: perguntas e respostas sobre o tema
Quais erros técnicos podem levar à aglutinação falsa ao utilizar tzoliclones?
Violações da metodologia do exame levam à aglutinação falsa (resultado falso-positivo). Destacam-se os seguintes principais erros técnicos:
- Secagem da gota — causa a formação de "pilhas de moedas" de eritrócitos, levando à pseudo-aglutinação.
- Aglutinação pelo frio — ocorre quando a reação é realizada em condições de temperatura ambiente abaixo de 15 °C.
Para a prevenção desses erros, é necessário seguir estritamente o regime de temperatura (acima de 15 °C) e adicionar solução isotônica de cloreto de sódio à gota com reação duvidosa.
Para não confundir a marcação: anti-A — escarlate (cor vermelha), anti-B — azul.
Questões de aulas e exames
É possível realizar a reação a uma temperatura de 37 °C?
Não, o exame deve ser realizado estritamente a uma temperatura ambiente entre 15 e 25 °C.
Em qual proporção o sangue e o reagente são misturados?
A gota de sangue em estudo deve ser aproximadamente 10 vezes menor do que a gota de tzoliclone.
O que fazer se a aglutinação for fraca ou gerar dúvidas?
Na presença de aglutinação duvidosa, deve-se prosseguir para a determinação do grupo sanguíneo pelo método com eritrócitos padrão.
O que mais estudar sobre o tema
- Estrutura e funções dos anticorpos monoclonais (IgM)
- Princípios de obtenção de hibridomas em imunologia
- Causas do surgimento de aglutinação não específica
- Metodologia de determinação do grupo sanguíneo com eritrócitos padrão
- Sistema antigênico eritrocitário AB0: aglutinogênios e aglutininas
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