Método clásico: reacción de conglutinación
Antes de realizar la prueba, es necesario conocer el grupo sanguíneo del paciente según el sistema AB0. Para el estudio se utilizan dos series diferentes de sueros anti-Rh que sean compatibles con el grupo sanguíneo del sujeto analizado.
El procedimiento se realiza en una placa de Petri:
- En la primera fila se colocan tres gotas de suero de una serie y en la segunda, de la otra serie.
- Se añade la sangre analizada (proporción de suero a sangre de 10:1 o 5:1).
- Como control de actividad se añaden eritrocitos estándar Rh+.
- Para el control de especificidad se añaden eritrocitos estándar Rh-.
- Las gotas se mezclan suavemente, se tapan y se colocan en un baño María a una temperatura de 46–48 °C durante 10 minutos.
Evaluación de resultados
Primero se evalúan las muestras de control: con los eritrocitos positivos debe producirse aglutinación, mientras que con los negativos debe estar ausente.
Interpretación de los resultados de la muestra de sangre del paciente:
- Si hay aglutinación en ambas series de sueros, la sangre se considera Rh positiva (Rh+).
- Si no se produce la aglutinación de los eritrocitos, la sangre es Rh negativa (Rh-).
Importante: a diferencia de la determinación del grupo AB0, al evaluar el factor Rh está terminantemente prohibido añadir solución salina fisiológica durante la reacción, ya que esto puede dar un resultado falso negativo.
Errores frecuentes en la prueba
La alteración de los resultados puede ser consecuencia de fallos en la técnica de realización:
- Uso de sueros anti-Rh con actividad reducida.
- Proporción incorrecta entre los volúmenes de suero y sangre.
- Incumplimiento del régimen de temperatura (calentamiento insuficiente o excesivo).
- Reducción del tiempo de incubación (menos de 10 minutos).
- Adición de solución de NaCl durante la reacción de conglutinación.
- Omisión de las muestras de control de actividad y especificidad.
- Incompatibilidad de grupo de los reactivos utilizados.
Método exprés de determinación
Este método se utiliza en casos de emergencia y no requiere calentamiento. Se emplea suero anti-Rh del grupo IV(AB), diluido con una solución de albúmina (20–30%) o dextrano (30–33%). El medio coloidal asegura la aglutinación de los eritrocitos a temperatura ambiente.
Cerca de la gota de reactivo se coloca suero de control Rh negativo sin anticuerpos. Se añade la sangre analizada (su volumen debe ser 2–3 veces menor que el del suero) y se mezcla durante 3–4 minutos. A continuación, se añade una gota de solución salina fisiológica y a los 5 minutos se evalúa el resultado.
Si la reacción es dudosa (aglutinación en ambas gotas) o no es posible determinar el factor Rh, en caso de transfusión de emergencia se debe utilizar exclusivamente sangre Rh negativa.
Preguntas de clases y exámenes
¿Por qué no se debe añadir solución salina fisiológica en el método clásico?
La adición de solución isotónica de cloruro de sodio altera la reacción de conglutinación y puede dar lugar a un resultado falso negativo.
¿Para qué se necesita la solución de dextrano o albúmina en el método exprés?
El medio coloidal de estas soluciones favorece la agregación de los eritrocitos sin necesidad de utilizar un baño María.
¿Qué hacer en caso de transfusión de emergencia si el resultado es dudoso?
En tal situación, se transunde únicamente sangre Rh negativa. En casos extremos, se permite la transfusión de sangre Rh+, pero estrictamente después de una prueba de compatibilidad individual.
Qué más repasar sobre el tema
- Mecanismo de la reacción de conglutinación
- Causas de aglutinación falsa
- Propiedades de los medios coloidales (dextrano y albúmina)
- Prueba de compatibilidad por factor Rh antes de la hemotransfusión
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