Naturaleza y propiedades de los tsoliclones
Los tsoliclones anti-A y anti-B se utilizan en cirugía y transfusiología en sustitución de los sueros isohemaglutinantes estándar. Por su naturaleza, son anticuerpos monoclonales pertenecientes a la clase IgM.
Son producidos por células especiales llamadas hibridomas. El hibridoma es el resultado de la fusión de linfocitos B murinos (que forman anticuerpos) con células de mieloma de ratón. El reactivo listo para usar es un líquido ascítico diluido obtenido de ratones portadores de tales hibridomas.
La principal ventaja de los tsoliclones radica en que proporcionan una reacción de aglutinación más rápida y pronunciada. Los preparados se comercializan en forma líquida (en viales o ampollas), estando el anti-A teñido de rojo y el anti-B de azul. Los reactivos deben almacenarse en el refrigerador a una temperatura de 2 a 8 °C, y su vida útil es de 2 años.
Técnica de realización del estudio
Para obtener resultados fiables, es necesario cumplir estrictamente con la metodología. La reacción se realiza a una temperatura ambiente de 15 a 25 °C. Como superficie de trabajo se utiliza una placa de porcelana blanca o una placa marcada.
Algoritmo de actuación paso a paso:
- Sobre la superficie preparada se deposita una gota grande de tsoliclón anti-A y otra de anti-B.
- Cerca de cada gota de reactivo se coloca la sangre de prueba. El volumen de la gota de sangre debe ser 10 veces menor que el volumen de la gota de tsoliclón.
- Utilizando varillas de vidrio separadas (o las esquinas de los portaobjetos), las gotas se mezclan suavemente.
- La placa se balancea ligeramente para una mejor interacción de los componentes.
Visualmente, la reacción suele empezar a manifestarse en los primeros 3–5 segundos. En los casos positivos, se forman pequeños agregados rojos de eritrocitos que rápidamente se convierten en grandes grumos. La observación final del proceso y la evaluación definitiva se realizan en un plazo de 2,5 minutos.
Interpretación de resultados
La evaluación del grupo sanguíneo según el sistema AB0 se basa en la presencia (+) o ausencia (–) de aglutinación de los eritrocitos con el tsoliclón específico. Son posibles cuatro escenarios:
- Grupo I (0): no hay reacción con ninguno de los tsoliclones: anti-A (–) y anti-B (–). Conclusión: los eritrocitos no contienen aglutinógenos A y B.
- Grupo II (A): se observa aglutinación solo con anti-A (+) y está ausente con anti-B (–). Conclusión: los eritrocitos contienen aglutinógeno A.
- Grupo III (B): la aglutinación está ausente con anti-A (–) y se observa con anti-B (+). Conclusión: los eritrocitos contienen aglutinógeno B.
- Grupo IV (AB): la reacción de aglutinación se produce con ambos tsoliclones: anti-A (+) y anti-B (+). Conclusión: los eritrocitos contienen ambos aglutinógenos, A y B.
Control adicional para el grupo IV (AB)
Si el estudio revela una reacción positiva con ambos reactivos, se asigna preliminarmente el grupo sanguíneo IV (AB). Sin embargo, este resultado requiere una confirmación obligatoria para excluir el fenómeno de aglutinación no específica.
Para el control se utiliza solución isotónica de cloruro de sodio (NaCl). Se deposita una gota grande (0,1 ml) de solución salina fisiológica en la placa y se mezcla con una gota pequeña (0,01 ml) de la sangre analizada. Si en esta gota de control no hay aglutinación, se confirma la veracidad del grupo sanguíneo IV.
Nota: Si en cualquier etapa del estudio surge una aglutinación dudosa, el método con tsoliclones se complementa con el método clásico utilizando eritrocitos estándar.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿Qué errores técnicos pueden provocar una falsa aglutinación al utilizar tsoliclones?
Las alteraciones en la metodología del estudio conducen a una falsa aglutinación (resultado falso positivo). Se distinguen los siguientes errores técnicos principales:
- Secado de la gota — provoca la formación de «pila de monedas» de eritrocitos, lo que conduce a una pseudoaglutinación.
- Aglutinación en frío — se produce al realizar la reacción a una temperatura ambiente inferior a 15 °C.
Para la prevención de estos errores, es necesario cumplir estrictamente con el régimen de temperatura (superior a 15 °C) y añadir solución isotónica de cloruro de sodio a la gota con reacción dudosa.
Para no confundir el marcado: anti-A — escarlata (color rojo), anti-B — azul.
Preguntas de clases y exámenes
¿Se puede realizar la reacción a una temperatura de 37 °C?
No, el estudio debe realizarse estrictamente a una temperatura ambiente de 15 a 25 °C.
¿En qué proporción se mezclan la sangre y el reactivo?
La gota de sangre de prueba debe ser aproximadamente 10 veces más pequeña que la gota de tsoliclón.
¿Qué hacer si la aglutinación es débil o genera dudas?
En presencia de una aglutinación dudosa, es necesario pasar a la determinación del grupo sanguíneo mediante el método con eritrocitos estándar.
Qué más repasar sobre el tema
- Estructura y funciones de los anticuerpos monoclonales (IgM)
- Principios de obtención de hibridomas en inmunología
- Causas de aparición de la aglutinación no específica
- Metodología para la determinación del grupo sanguíneo con eritrocitos estándar
- Sistema antígeno eritrocitario AB0: aglutinógenos y aglutininas
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