Méthode classique : réaction de conglutination
Avant d'analyser, il est nécessaire de connaître le groupe sanguin AB0 du patient. Deux séries différentes de sérums anti-Rh compatibles avec le groupe sanguin du sujet sont utilisées pour l'étude.
La procédure est réalisée dans une boîte de Petri :
- Trois gouttes de sérum d'une série sont déposées dans la première rangée, et celles d'une autre série dans la seconde.
- Le sang à examiner est ajouté (rapport sérum/sang de 10:1 ou 5:1).
- Des érythrocytes standard Rh+ sont ajoutés comme contrôle d'activité.
- Des érythrocytes standard Rh- sont ajoutés pour contrôler la spécificité.
- Les gouttes sont mélangées délicatement, recouvertes d'un couvercle et placées dans un bain-marie à une température de 46–48 °C pendant 10 minutes.
Évaluation des résultats
Les échantillons témoins sont évalués en premier : l'agglutination doit se produire avec les érythrocytes positifs et être absente avec les négatifs.
Interprétation des résultats de l'échantillon de sang du patient :
- Si une agglutination est présente dans les deux séries de sérums, le sang est considéré comme Rh-positif (Rh+).
- Si aucune agglutination des érythrocytes ne se produit, le sang est Rh-négatif (Rh-).
Important : contrairement à la détermination du groupe AB0, lors de l'évaluation du facteur Rhésus, il est strictement interdit d'ajouter une solution physiologique pendant la réaction, car cela peut entraîner un faux négatif.
Erreurs fréquentes lors de l'analyse
La distorsion des résultats peut être la conséquence de violations de la technique opératoire :
- Utilisation de sérums anti-Rh à l'activité réduite.
- Mauvais rapport des volumes de sérum et de sang.
- Non-respect du régime thermique (chauffage insuffisant ou excessif).
- Réduction du temps d'incubation (moins de 10 minutes).
- Ajout de solution de NaCl pendant la réaction de conglutination.
- Ignorer les échantillons témoins pour l'activité et la spécificité.
- Incompatibilité de groupe des réactifs utilisés.
Méthode de détermination express
Cette méthode est utilisée dans les cas d'urgence et ne nécessite pas de chauffage. On utilise un sérum anti-Rh de groupe IV(AB), dilué avec une solution d'albumine (20–30 %) ou de dextrane (30–33 %). Le milieu colloïdal assure l'agglutination des érythrocytes à température ambiante.
À côté de la goutte de réactif, on dépose un sérum témoin Rh-négatif sans anticorps. On ajoute le sang à tester (en quantité 2 à 3 fois inférieure à celle du sérum) et on mélange pendant 3 à 4 minutes. On ajoute ensuite une goutte de solution saline et on évalue le résultat après 5 minutes.
Si la réaction est douteuse (agglutination dans les deux gouttes) ou s'il est impossible de déterminer le rhésus, seul du sang Rh-négatif doit être utilisé lors d'une transfusion d'urgence.
Questions des cours et des examens
Pourquoi est-il interdit d'ajouter une solution physiologique dans la méthode classique ?
L'ajout d'une solution isotonique de chlorure de sodium perturbe la réaction de conglutination et peut entraîner un faux négatif.
Pourquoi la solution de dextrane ou d'albumine est-elle nécessaire dans la méthode express ?
Le milieu colloïdal de ces solutions favorise l'agrégation des érythrocytes sans qu'il soit nécessaire d'utiliser un bain-marie.
Que faire en cas de transfusion d'urgence si le résultat est douteux ?
Dans une telle situation, seul du sang Rh-négatif est transfusé. Dans les cas extrêmes, la transfusion de sang Rh+ est tolérée, mais strictement après un test de compatibilité individuelle.
À étudier également sur le sujet
- Mécanisme de la réaction de conglutination
- Causes de la fausse agglutination
- Propriétés des milieux colloïdaux (dextrane et albumine)
- Test de compatibilité du facteur Rhésus avant la transfusion sanguine
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