Nature et propriétés des tsoliclones
Les tsoliclones anti-A et anti-B sont utilisés en chirurgie et en transfusion sanguine en remplacement des sérums isohémagglutinants standards. Par leur nature, ce sont des anticorps monoclonaux appartenant à la classe des IgM.
Ils sont produits par des cellules spéciales, les hybridomes. Un hybridome résulte de la fusion de lymphocytes B de souris (qui produisent des anticorps) avec des cellules de myélome de souris. Le réactif prêt à l'emploi est un liquide ascitique dilué obtenu à partir de souris porteuses de ces hybridomes.
Le principal avantage des tsoliclones réside dans le fait qu'ils fournissent une réaction d'agglutination plus rapide et plus prononcée. Les préparations sont disponibles sous forme liquide (en flacons ou en ampoules), l'anti-A étant coloré en rouge et l'anti-B en bleu. Les réactifs doivent être conservés au réfrigérateur à une température de 2 à 8 °C et leur durée de conservation est de 2 ans.
Technique de réalisation du test
Pour obtenir des résultats fiables, la méthodologie doit être strictement respectée. La réaction est menée à une température ambiante comprise entre 15 et 25 °C. Une plaque de porcelaine blanche ou une lame marquée sert de surface de travail.
Algorithme étape par étape :
- Une grande goutte de tsoliclone anti-A et une de tsoliclone anti-B sont déposées sur la surface préparée.
- Le sang à examiner est déposé à côté de chaque goutte de réactif. Le volume de la goutte de sang doit être 10 fois inférieur au volume de la goutte de tsoliclone.
- Les gouttes sont mélangées délicatement à l'aide de bâtonnets de verre distincts (ou des coins de lames porte-objets).
- La plaque est légèrement basculée pour favoriser l'interaction des composants.
Visuellement, la réaction commence généralement à apparaître dès les premières 3 à 5 secondes. Dans les cas positifs, de petits agrégats rouges d'érythrocytes se forment et se transforment rapidement en grands flocons. L'observation finale du processus et l'évaluation définitive sont réalisées en l'espace de 2,5 minutes.
Interprétation des résultats
L'évaluation du groupe sanguin selon le système AB0 repose sur la présence (+) ou l'absence (–) d'agglutination des érythrocytes avec un tsoliclone spécifique. Quatre scénarios sont possibles :
- Groupe I (0) : absence de réaction avec les deux tsoliclones — anti-A (–) et anti-B (–). Conclusion : les érythrocytes ne possèdent pas d'agglutinogènes A et B.
- Groupe II (A) : agglutination observée uniquement avec l'anti-A (+) et absente avec l'anti-B (–). Conclusion : les érythrocytes contiennent l'agglutinogène A.
- Groupe III (B) : absence d'agglutination avec l'anti-A (–) et observée avec l'anti-B (+). Conclusion : les érythrocytes contiennent l'agglutinogène B.
- Groupe IV (AB) : réaction de précipitation se produisant avec les deux tsoliclones — anti-A (+) et anti-B (+). Conclusion : les érythrocytes contiennent les deux agglutinogènes A et B.
Contrôle supplémentaire pour le groupe IV (AB)
Si le test révèle une réaction positive avec les deux réactifs, le groupe sanguin IV (AB) est attribué à titre préliminaire. Cependant, ce résultat requiert une confirmation obligatoire afin d'exclure le phénomène d'agglutination non spécifique.
Une solution isotonique de chlorure de sodium (NaCl) est utilisée comme contrôle. Une grande goutte (0,1 ml) de solution saline est déposée sur la plaque et mélangée à une petite goutte (0,01 ml) du sang étudié. Si aucune agglutination n'est observée dans cette goutte témoin, l'authenticité du groupe sanguin IV est confirmée.
Remarque : Si à n'importe quelle étape de l'étude une agglutination douteuse se manifeste, la méthode aux tsoliclones est complétée par la méthode classique utilisant des érythrocytes étalons.
En bref : réponses aux questions sur le sujet
Quelles erreurs techniques peuvent entraîner une fausse agglutination lors de l'utilisation de tsoliclones ?
Les fausses agglutinations (résultats faussement positifs) résultent de violations de la méthodologie de test. Les principales erreurs techniques identifiées sont les suivantes :
- Dessiccation de la goutte — provoque la formation de « rouleaux » d'érythrocytes, conduisant à une pseudo-agglutination.
- Agglutination par le froid — survient lorsque la réaction est menée à une température ambiante inférieure à 15 °C.
Pour prévenir ces erreurs, il est impératif de respecter strictement le régime de température (supérieur à 15 °C) et d'ajouter une solution isotonique de chlorure de sodium à la goutte présentant une réaction douteuse.
Pour ne pas inverser le marquage : anti-A — rouge vif, anti-B — bleu.
Questions des cours et des examens
Peut-on réaliser la réaction à une température de 37 °C ?
Non, le test doit être effectué strictement à une température ambiante comprise entre 15 et 25 °C.
Dans quelle proportion mélange-t-on le sang et le réactif ?
La goutte de sang à analyser doit être environ 10 fois plus petite que la goutte de tsoliclone.
Que faire si l'agglutination est faiblement prononcée ou sujette à caution ?
En présence d'une agglutination douteuse, il est nécessaire de procéder à la détermination du groupe sanguin par la méthode aux érythrocytes étalons.
À étudier également sur le sujet
- Structure et fonctions des anticorps monoclonaux (IgM)
- Principes d'obtention des hybridomes en immunologie
- Causes d'apparition de l'agglutination non spécifique
- Méthodologie de détermination du groupe sanguin avec des érythrocytes étalons
- Système antigénique érythrocytaire AB0 : agglutinogènes et agglutinines
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