Prélèvement et préparation du matériel biologique
Afin de réaliser correctement la recherche d'anticorps, le spécialiste doit obtenir la partie liquide du sang du patient, exempte de ses propres éléments figurés. Le processus de préparation comprend deux étapes principales :
- Prélèvement du matériel. Le prélèvement de sang veineux du patient est effectué dans la salle de soins. Pour réaliser la réaction de manière optimale, un volume de 3 à 4 ml est nécessaire.
- Obtention du sérum. Le sang recueilli est soumis à une centrifugation obligatoire. Cette procédure physique est nécessaire pour séparer le sédiment cellulaire. À l'issue de la centrifugation, le chercheur obtient le sérum, qui servira de matériel principal du patient pour l'analyse (l'utilisation de plasma, d'un lyseurat ou du sédiment n'est pas prévue dans cette méthode).
Méthode et technique de réalisation de la réaction
La procédure de typage proprement dite exige de l'attention et le respect des intervalles de temps. Le déroulement est le suivant :
- Tout d'abord, une grande goutte de sérum du patient examiné est déposée sur une plaque blanche spécialement marquée.
- On ajoute au sérum des érythrocytes standard de groupes connus — I, II et III. Il est important de se rappeler que c'est précisément la masse érythrocytaire d'un groupe connu qui sert de réactif, et non des sérums standard ou des anticorps monoclonaux (anti-A et anti-B).
- Proportion stricte : le volume de la goutte d'érythrocytes standard ajoutée doit être exactement cinq fois inférieur au volume de la goutte de sérum testé déposée.
- Les réactifs sont mélangés délicatement à l'aide de l'angle d'une lamelle propre.
- Après le mélange, la plaque doit être agitée continuellement pendant 3 minutes.
- Ensuite, on ajoute une goutte de solution isotonique de NaCl au mélange réactionnel.
- L'évaluation finale du résultat (présence ou absence de l'agglutination des cellules) est réalisée au total 5 minutes après le début de la réaction.
Interprétation des résultats de l'examen
L'évaluation du groupe sanguin repose sur la mise en évidence du phénomène d'agglutination, c'est-à-dire l'agglutination spécifique des érythrocytes standard sous l'effet des anticorps contenus dans le sérum du patient.
- Groupe I(0) : Le sérum contient des anticorps provoquant une agglutination avec les érythrocytes standard II(A) et III(B). Il n'y a pas de réaction avec les cellules I(0).
- Groupe II(A) : Le sérum donne une agglutination exclusivement avec les érythrocytes standard III(B). Lors de l'ajout des érythrocytes I(0) et II(A), aucune agglutination ne se produit.
- Groupe III(B) : L'agglutination est clairement observée uniquement avec les érythrocytes II(A). Dans les gouttes contenant les érythrocytes standard I(0) et III(B), la réaction est totalement absente.
- Groupe IV(AB) : Le sérum ne contient pas d'anticorps systémiques, par conséquent l'agglutination est absente avec tous les érythrocytes standard (I, II et III).
En bref : réponses aux questions sur le sujet
Dans quel but ajoute-t-on une solution isotonique de NaCl au mélange réactionnel ?
La solution isotonique de chlorure de sodium (NaCl) est ajoutée au mélange réactionnel à titre préventif contre la fausse agglutination, c'est-à-dire un résultat faux-positif. Cette action permet d'éviter la pseudo-agglutination, qui survient en raison du séchage de la goutte et de la formation de « rouleaux » d'érythrocytes, créant l'apparence d'une réaction alors qu'elle est absente en réalité.
Quels agglutinines (anticorps) exacts contient le sérum d'un patient du deuxième groupe sanguin II(A) ?
Le sérum sanguin d'un patient du deuxième groupe II(A) contient exclusivement l'agglutinine (anticorps) $\beta$. Conformément à la règle d'incompatibilité du système ABO, la présence simultanée de composants homonymes dans le sang humain est impossible. Par conséquent, étant donné que l'agglutinogène A se trouve sur la membrane des érythrocytes de ce groupe, seul l'agglutinine hétéronyme $\beta$ est normalement présent dans le sérum sanguin.
À quelle température ambiante la réaction de détermination du groupe sanguin doit-elle être effectuée ?
La réaction de détermination du groupe sanguin doit être effectuée à une température ambiante strictement supérieure à 15 °C. Le respect de ce régime thermique est une mesure obligatoire pour prévenir l'agglutination au froid. En dessous de 15 °C, un résultat faux-positif peut survenir, simulant une réaction alors qu'il n'y a pas de véritable agglutination.
Le sérum ne donne jamais d'agglutination avec les érythrocytes de son propre groupe et du groupe I(0).
Questions des cours et des examens
Quel matériel du patient est nécessaire pour cette méthode ?
L'analyse nécessite le sérum propre du patient, obtenu par centrifugation de 3 à 4 ml de sang veineux.
Dans quel rapport les réactifs doivent-ils être mélangés ?
Le mélange se fait dans une proportion de 5:1. La goutte de sérum du patient doit être 5 fois plus grande que la goutte d'érythrocytes standard.
Quand ajoute-t-on la solution isotonique et à quoi sert-elle ?
La goutte de solution isotonique de NaCl est ajoutée après 3 minutes d'agitation de la plaque. Le résultat final est évalué à la 5e minute.
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