Principio de diferenciación bacteriana
La separación de los microorganismos según el método de Gram depende directamente de la arquitectura de su pared celular.
- Bacterias grampositivas (G+) se distinguen por la presencia de una pared celular muy gruesa. Debido a su estructura, adquieren un profundo color azul-violeta tras una tinción específica.
- Bacterias gramnegativas (G-), por el contrario, poseen una pared celular delgada. Tras finalizar todas las etapas de tinción, estas células se ven de color rojo (o rojo rosado).
Bases físico-químicas del método
La diferencia en el color final se explica por la reacción del peptidoglicano ante el tratamiento secuencial con reactivos químicos, principalmente el alcohol.
- En las bacterias grampositivas, la base de la pared está formada por un peptidoglicano denso y multicapa. Cuando se aplica alcohol al frotis, este armazón denso retiene firmemente en el interior de la célula el complejo formado por cristal violeta (genciana violeta) y yodo. Por ello, las células conservan su tono azul-violeta primario.
- En las bacterias gramnegativas, el contenido de peptidoglicano es críticamente bajo: constituye apenas del 5 al 10% de la masa de la pared. Bajo la acción del alcohol, se produce un rápido lavado del colorante primario y la célula se decolora por completo. Para visualizar estas bacterias, se utiliza un colorante de contraste (fucsina o safranina), que les otorga el color rojo.
Bioquímica del peptidoglicano
El peptidoglicano es un polímero complejo que proporciona resistencia estructural a la pared. Su armazón molecular está formado por cadenas de glicanos compuestas por moléculas alternas de:
- N-acetilglucosamina
- Ácido N-acetilmurámico
Para dotar a la pared de solidez monolítica, estas cadenas de glicanos se interconectan mediante resistentes enlaces peptídicos.
Acción de la lisozima y respuesta inmune
En el organismo existe un mecanismo natural de destrucción de la pared bacteriana mediante la enzima lisozima. La acción de la lisozima consiste en destruir de forma específica los enlaces químicos dentro de las cadenas de glicanos del peptidoglicano.
El proceso de degradación de la pared bacteriana desempeña un papel importante en la activación del sistema inmune. El principal producto de dicha escisión, el muramildipéptido, es un potente inmunomodulador que estimula las reacciones defensivas del organismo anfitrión.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿Qué colorantes se utilizan en la tinción de Gram como colorante primario y de contraste?
Como colorante primario en la tinción de Gram se utiliza el cristal violeta (genciana violeta), y como colorante de contraste, la fucsina o la safranina.
- Colorante primario: cristal violeta (genciana violeta), que junto con el yodo forma un complejo retenido firmemente por el peptidoglicano de las bacterias grampositivas.
- Colorante de contraste: fucsina o safranina, que son captados por las bacterias gramnegativas tras su decoloración con alcohol.
¿Qué etapas comprende el procedimiento estándar de tinción bacteriana de Gram?
El procedimiento de tinción de Gram incluye las etapas de tratamiento con el colorante primario y yodo, decoloración con alcohol y contratinción.
- Tinción primaria: aplicación de cristal violeta (genciana violeta) y yodo para formar un complejo teñido.
- Decoloración: tratamiento con alcohol, que lava el colorante de la pared de las bacterias gramnegativas.
- Contratinción: uso de fucsina o safranina para conferir un color rojo a las células decoloradas.
GramPOSITIVAS: PUSIERON (depositó) mucho peptidoglicano (la pared gruesa retiene firmemente el colorante violeta).
Preguntas de clases y exámenes
¿Por qué las bacterias grampositivas no se decoloran con alcohol?
Tienen un potente peptidoglicano multicapa que, tras el tratamiento con alcohol, retiene fuertemente dentro de la célula el complejo «cristal violeta + yodo».
¿Qué colorante confiere el color rojo a las bacterias gramnegativas?
El color rojo es aportado por el colorante de contraste —fucsina o safranina—, el cual es absorbido por las células tras su completa decoloración con alcohol.
¿De qué componentes constan las cadenas de glicanos?
Están compuestas por residuos alternos de N-acetilglucosamina y ácido N-acetilmurámico.
¿Cómo actúa la lisozima sobre la bacteria?
La enzima lisozima rompe los enlaces químicos directamente en las cadenas de glicanos del peptidoglicano, lo que conduce a la degradación de la pared celular.
Qué más repasar sobre el tema
- Etapas de formación del complejo «cristal violeta + yodo»
- Mecanismo de acción inmunomoduladora del muramildipéptido
- Funciones de los enlaces peptídicos en la pared celular
- Estructura de la cápsula bacteriana y los flagelos
- Diferencias en la membrana citoplasmática entre bacterias G+ y G-
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