Estrategia de laboratorio y elección de medios
Dado que diferentes microorganismos pueden causar un cuadro clínico similar de la enfermedad, en microbiología se aplica el principio de la «batería de medios». Esto implica el uso simultáneo de todo un conjunto de medios selectivos y diferenciales-diagnósticos para la siembra de una sola muestra. Esto aumenta significativamente las posibilidades de éxito en la detección e identificación primaria del patógeno.
Cada medio de la «batería» está diseñado para su propio grupo de microorganismos:
- Medio de Endo: se utiliza para el aislamiento de enterobacterias.
- Agar yema-sal: óptimo para el crecimiento de estafilococos.
- Agar CPC (con cloruro de cetilpiridinio): se utiliza para el aislamiento selectivo de *Pseudomonas aeruginosa*.
- Medio de Sabouraud: diseñado para el cultivo de hongos.
- Medio de tioglicolato: necesario para la detección de anaerobios.
Táctica de siembra según el biotopo
La elección del medio de cultivo depende directamente de si el lugar del que se toma el material es normalmente estéril.
- Focos estériles (sangre, líquido cefalorraquídeo). Normalmente, estos líquidos no contienen microorganismos. Cualquier microbio detectado es potencialmente el agente causal. Por lo tanto, el material se siembra en medios de cultivo enriquecidos para proporcionar las condiciones más favorables para el crecimiento de la gama más amplia posible de microorganismos.
- Focos no estériles (biotopos con microflora normal). En tales muestras siempre hay flora acompañante. Para evitar que esta «eclipse» el crecimiento del patógeno buscado, se emplean medios selectivos (electivos). Su tarea principal es suprimir el crecimiento de la flora normal y permitir la multiplicación del patógeno específico.
Análisis cuantitativo en infecciones purulento-inflamatorias
En el diagnóstico de infecciones causadas por microorganismos oportunistas, la detección cualitativa (respuesta «sí/no») no es suficiente. Un requisito previo es la determinación cuantitativa (evaluación de la contaminación). Esto es necesario para diferenciar el verdadero papel etiológico del microbio de un simple estado de portador.
Para determinar la concentración, se utiliza el método de diluciones seriadas o la siembra en «estrías» según Gold (siembra en sectores). La interpretación de los resultados se basa en los siguientes criterios:
- Alta concentración: aislamiento de una o dos especies de microorganismos en gran cantidad (UFC). Esto indica directamente su papel como el principal factor etiológico.
- Baja concentración: detección de una asociación de múltiples especies en pequeña cantidad. Por lo general, esto indica una contaminación de la muestra con la microflora normal del paciente o la flora ambiental.
Cultivo y sensibilidad a los antibióticos
En la segunda etapa del estudio, cada porción de material se siembra previamente en un medio de enriquecimiento (por ejemplo, caldo de selenito en una proporción de 1:10), y al mismo tiempo se realizan siembras en medios sólidos y líquidos (agar sangre, medio de Endo, medio de tioglicolato).
Las condiciones de incubación son estándar: los cultivos se colocan en una estufa a 37 °C. Si se sospecha una infección anaerobia, el cultivo se realiza en aparatos especiales: anaerostatos.
Existen protocolos específicos, por ejemplo, para el aislamiento de salmonelas. En este caso, el material del medio de enriquecimiento y de la bilis nativa se siembra en agar sulfito de bismuto durante los 3 días siguientes.
Tras el recuento de colonias y la determinación de la especie, se evalúa la sensibilidad a los antibióticos. Regla importante: el análisis se realiza solo para patógenos con significación etiológica. Si se detecta una asociación microbiana (varios patógenos significativos), la sensibilidad a los fármacos se determina para cada miembro de esta asociación por separado.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿Qué medios de cultivo enriquecidos específicos se utilizan en el laboratorio para el hemocultivo para esterilidad?
Para el hemocultivo para esterilidad se utilizan medios de cultivo líquidos y bifásicos enriquecidos. En la práctica de laboratorio se emplean:
- Caldo bilis: se utiliza para el aislamiento de agentes causales de la fiebre tifoidea.
- Caldo glucosado: se utiliza como medio de enriquecimiento.
- Medio bifásico: incluye agar nutritivo inclinado y caldo semisólido con glucosa.
- Medio de tioglicolato: diseñado para la detección de anaerobios y microaerófilos.
- Medio de Sabouraud: se utiliza para la detección de hongos.
¿Cómo se realiza técnicamente la siembra en sectores por el método de Gold?
La siembra en sectores por el método de Gold se realiza utilizando un asa bacteriológica estándar de 2 mm de diámetro. La técnica incluye las siguientes etapas secuenciales:
- Una placa de Petri se divide convencionalmente en cuatro sectores (A, I, II, III).
- En el sector A se realiza la siembra primaria del material aplicando de 30 a 40 estrías.
- El asa bacteriológica debe esterilizarse a la llama obligatoriamente.
- Del sector A se hacen 4 estrías hacia el sector I.
- Del sector I se hacen 4 estrías hacia el sector II.
- Del sector II se hacen 4 estrías hacia el sector III.
La incubación de los cultivos se realiza en la estufa a 37 °C durante 24–72 horas.
¿Qué medios de enriquecimiento, además del caldo de selenito, se utilizan para la siembra preliminar del material clínico?
Para la siembra preliminar y el enriquecimiento del material clínico, además del caldo de selenito, se utilizan:
- Caldo glucosado: medio de enriquecimiento, en particular para estreptococos.
- Caldo salado: medio de enriquecimiento para estafilococos.
- Agua de peptona alcalina: medio de enriquecimiento en la siembra de heces y secreciones de heridas para el aislamiento de vibrios coléricos y Aeromonas spp.
Para memorizar el perfil de los medios, utilice asociaciones por las primeras letras o por el significado: Endo - Enterobacterias (coincidencia de sílabas), Yema-sal - *Staphylococcus aureus* (color amarillo de las colonias).
Preguntas de clases y exámenes
¿Por qué se utilizan varios medios de cultivo a la vez durante la siembra?
Debido a que diferentes patógenos pueden causar enfermedades con un cuadro clínico similar, se aplica el principio de la «batería de medios». El uso simultáneo de varios medios diferenciales-diagnósticos y selectivos permite no pasar por alto el patógeno buscado.
¿Para qué determinar la cantidad de microorganismos en infecciones purulentas?
Las infecciones purulento-inflamatorias a menudo son causadas por flora oportunista. El análisis cuantitativo es necesario para distinguir al verdadero patógeno (presente en alta concentración) del portador habitual o de la contaminación de la muestra.
¿Qué medios se emplean para el hemocultivo y el cultivo de líquido cefalorraquídeo?
La sangre y el líquido cefalorraquídeo son focos normalmente estériles. Para ellos se utilizan medios de cultivo enriquecidos para garantizar el crecimiento sin obstáculos de cualquier microorganismo presente en la muestra.
¿Cómo se determina la sensibilidad a los antibióticos en infecciones mixtas?
Si se detecta en el material una asociación de varios patógenos, la sensibilidad a los fármacos se determina obligatoriamente de forma individual para cada asociado, siempre que tengan significación etiológica.
Qué más repasar sobre el tema
- Mecanismos de supresión de la flora normal en medios selectivos
- Técnica de siembra en sectores según el método de Gold
- Algoritmo para la realización del método de diluciones seriadas
- Estructura y principios de funcionamiento del anaerostato
- Características del crecimiento de las salmonelas en agar sulfito de bismuto
Estudie el tema completo en el curso de «Microbiología»
Aquí tienes un resumen. En el curso encontrarás todo lo que preguntan en clase y en el examen.
- Guía metodológica completa sobre el tema «Etapa de laboratorio de la investigación microbiológica» y otras 4 383 páginas de la asignatura
- Ejercicios y pruebas después de cada tema, igual que en el examen práctico
- El tutor de IA responderá a tus preguntas sobre el tema en cualquier momento
- 141 videotutoriales de la asignatura
Otros temas de la sección «Microbiología clínica»
Videoclases gratuitas: microbiologíaLecciones breves con resúmenes, sin registro.
Material preparado por los profesores de WhiteCoat Pro según el plan de estudios de las facultades de medicina. De carácter educativo.