Características generales y tipos de reacciones
Todas las reacciones serológicas de este grupo se basan en una regla estricta: las moléculas del complemento entran en acción únicamente cuando un anticuerpo específico encuentra su antígeno y se une a él. Hasta ese momento, el complemento permanece inactivo.
En la práctica de laboratorio se distinguen tres tipos principales de estas reacciones:
- Reacción de fijación del complemento (RFC). Es el método más complejo, que requiere una preparación sumamente rigurosa de todos los componentes antes de realizar el análisis.
- Reacción de hemólisis radial (RHR). Este método se basa técnicamente en el proceso de difusión de los componentes en un gel especial.
- Reacción de inmunoadherencia (RIP). Está dirigida al trabajo con antígenos corpusculares grandes y a la evaluación de su interacción con las células.
Mecanismo de la reacción de fijación del complemento (RFC)
La RFC es una prueba de múltiples etapas. Para su realización se requieren dos sistemas independientes de componentes que se introducen en la reacción de forma secuencial.
El primer sistema (principal) incluye:
- Antígeno conocido (Ag);
- Suero del paciente en estudio (puede contener o no los anticuerpos buscados);
- Complemento exógeno (C).
El segundo sistema (indicador o hemolítico) es necesario para la visualización de los resultados. Consiste en:
- Eritrocitos de carnero;
- Suero hemolítico (anticuerpos específicos desarrollados contra los eritrocitos de carnero).
La esencia del método radica en la competencia por el complemento entre el sistema principal y el indicador.
Interpretación de los resultados de la RFC
El resultado de la reacción depende de si el complemento se fijó o no en la primera etapa con los complejos del suero del paciente. Son posibles dos escenarios:
Opción A: Reacción positiva (el paciente está enfermo)
- En la primera etapa, el suero del paciente contiene anticuerpos específicos.
- Estos se unen al antígeno formando un complejo inmune estable.
- El complemento añadido reconoce este complejo y se une firmemente a él (se consume).
- Al añadir el sistema hemolítico en la segunda etapa, ya no queda complemento libre en la solución.
- Resultado: No hay hemólisis. Los eritrocitos de carnero permanecen intactos y simplemente sedimentan en el fondo del tubo. Se confirma el diagnóstico.
Opción B: Reacción negativa (el paciente está sano)
- El suero de una persona sana carece de los anticuerpos necesarios.
- El complejo inmune no se forma en la primera etapa.
- Todo el complemento añadido permanece completamente libre.
- Tras añadir el sistema indicador, el complemento libre ataca a los eritrocitos de carnero sensibilizados.
- Resultado: Se produce la destrucción total de los eritrocitos. Se observa una hemólisis marcada y el líquido adquiere el aspecto de «sangre lacada». El diagnóstico no se confirma.
Reacción de inmunoadherencia (RIP)
Esta reacción permite visualizar la interacción de objetos grandes. Su esencia radica en la activación del complemento por antígenos corpusculares, entre los cuales se encuentran células bacterianas intactas o virus previamente tratados con suero inmune.
Mecanismo paso a paso de la RIP:
- Se produce la formación de un complejo primario entre el antígeno corpuscular y el anticuerpo.
- Este complejo activa el sistema del complemento, lo que conduce a una producción masiva del componente C3b.
- Las moléculas de C3b se depositan en la superficie del complejo y comienzan a actuar como un «pegamento» biológico.
Resultado: El antígeno corpuscular, cubierto de moléculas de C3b, se adhiere a las membranas de las células diana que poseen los receptores correspondientes. Estas células incluyen eritrocitos humanos, plaquetas y macrófagos. Visualmente, al mezclar estas células con los complejos inmunes, se observa su unión, la cual se asemeja a una reacción de aglutinación clásica.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿Qué clases de inmunoglobulinas son capaces de fijar el complemento en las reacciones serológicas?
Tienen la capacidad de fijar y activar el sistema del complemento las inmunoglobulinas de las clases IgM e IgG. Entre las inmunoglobulinas de clase G, esta función efectora se manifiesta predominantemente en las subclases IgG1 e IgG3. La activación se produce por la vía clásica, cuando el componente iniciador C1q se une al fragmento Fc de estos anticuerpos que forman parte del complejo inmune «antígeno-anticuerpo».
¿Para el diagnóstico de qué enfermedades infecciosas se utiliza la reacción de fijación del complemento?
La reacción de fijación del complemento se emplea en el diagnóstico serológico de diversas infecciones.
En las fuentes citadas, la RFC se indica para las siguientes enfermedades y situaciones:
- Rickettsiosis exantemática del norte de Asia — detección de anticuerpos fijadores del complemento; título diagnóstico de 1:40, el estudio también puede realizarse en sueros pareados.
- Fiebre exantemática de Astracán — diagnóstico serológico mediante RFC; título diagnóstico de 1:40 o superior.
- Infección causada por R. prowazekii — diagnóstico serológico mediante RFC, IHA y ELISA.
- Coxielosis / fiebre Q — diagnóstico serológico mediante RFC, ELISA y RIF indirecta.
- Sífilis — históricamente se utilizaba la RFC, reacción de Wassermann.
- Fiebre dengue — método serológico con análisis de sueros pareados, incluyendo la RFC.
- Infección por rotavirus — la RFC se utiliza como método serológico para el diagnóstico retrospectivo.
- Encefalitis transmitida por garrapatas — entre los métodos de investigación serológica se indica la RFC.
¿En qué tipo de gel exactamente se realiza la reacción de hemólisis radial?
La reacción de hemólisis radial se lleva a cabo en un gel de agar. En la composición de este medio se incorporan previamente eritrocitos de carnero y complemento. Al añadir el suero hemolítico en los pocillos, se produce una difusión radial de los anticuerpos, lo que provoca la destrucción de los eritrocitos y la formación de una zona de hemólisis visible.
Paradoja de la RFC: si NO hay hemólisis (los eritrocitos están intactos y sedimentados), la reacción es POSITIVA (hay anticuerpos). Si SÍ hay hemólisis («sangre lacada»), la reacción es NEGATIVA (no hay anticuerpos).
Preguntas de clases y exámenes
¿En qué caso el sistema del complemento comienza a funcionar en las reacciones serológicas?
La activación se produce exclusivamente en el momento en que se forma el complejo específico «antígeno-anticuerpo».
¿Por qué se necesitan eritrocitos de oveja en la RFC?
Actúan como parte del sistema indicador. Si el complemento permanece libre, destruirá los eritrocitos de carnero y veremos hemólisis.
¿Qué células tienen receptores para el componente C3b?
Los receptores específicos para C3b están presentes en la superficie de los eritrocitos humanos, plaquetas y macrófagos.
¿Qué representa el fenómeno de «sangre lacada» en la RFC?
Esta es una manifestación visual de la hemólisis de eritrocitos de oveja, que se observa con un resultado negativo de la prueba, cuando no hay anticuerpos en el suero.
Qué más repasar sobre el tema
- Reglas exactas para la preparación y titulación de componentes para la reacción de fijación del complemento
- Mecánica de la difusión de antígenos y anticuerpos en gel durante la realización de la reacción de hemólisis radial
- El papel de los macrófagos y las plaquetas en la depuración de inmunocomplejos del organismo a través de los receptores C3b
- Especificidad del procesamiento de antígenos particulados con sueros inmunes
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