Conteúdo · 12 seções
- 1. História e autor
- 2. Metodologia (4 etapas)
- 3. Estrutura da parede celular
- 4. Bactérias Gram+ — principais
- 5. Bactérias Gram− — principais
- 6. «Não se coram pelo método de Gram»
- 7. Aplicação clínica
- 8. Antibioticoterapia empírica
- 9. Limitações do método
- 10. Erros no exame
- 11. Alternativas modernas e complementos
- 12. FAQ
Em poucas palavras. A coloração de Gram (1884, Hans Christian Gram) é o método básico de classificação bacteriana: as Gram+ coram-se de roxo (parede celular espessa com peptidoglicano retém o complexo cristal violeta-iodo), as Gram− — de rosa (peptidoglicano fino + membrana externa com LPS, o complexo é lavado com álcool, depois contracorado com safranina/fucsina). Em 3 a 5 min fornece uma orientação: cocos Gram+ — estafilo/strepto/enterococos; bacilos Gram− — grupo entérico, pseudomonas; bacilos Gram+ — clostrídios, lísterias, bacilos; cocos Gram− — neissérias. É fundamental para a escolha da antibioticoterapia empírica antes da cultura.
1. História e autor
- Desenvolvido em 1884 pelo microbiologista dinamarquês Hans Christian Gram.
- Inicialmente para diferenciar o pneumococo da Klebsiella em esfregaços pulmonares.
- Desde a década de 1920, tornou-se o padrão em microbiologia médica.
- Baseado nas diferenças na estrutura da parede celular.
2. Metodologia (4 etapas)
| Etapa | Reagente | Tempo | Resultado |
|---|---|---|---|
| 1. Coloração primária | Violeta de genciana ou cristal violeta | 1 min | Todas as células ficam roxas |
| 2. Mordente | Solução de Lugol (I₂-KI) | 1 min | Formação do complexo cristal violeta-iodo |
| 3. Descoloração | Etanol a 96% ou acetona | 15–30 seg | Gram− perdem o corante; Gram+ retêm |
| 4. Contracoloração | Safranina ou fucsina de Pfeiffer | 1 min | Gram− ficam rosas; Gram+ continuam roxas |
- Entre as etapas — lavagem com água destilada.
- Crítico: não exceder o tempo na etapa de descoloração → resultados falso-negativos (Gram+ ficam rosas).
- Material — nativo (escarro, urina, líquor, secreção de ferida) ou de colônias em meio.
3. Estrutura da parede celular
Bactérias Gram+
- Camada espessa de peptidoglicano (20–80 nm).
- Ácidos teicoicos e lipoteicoicos.
- Ausência de membrana externa.
- O complexo peptidoglicano-iodo-cristal violeta é grande e não é lavado pelo álcool.
- Sensíveis a penicilinas, vancomicina, lisozima.
Bactérias Gram−
- Camada fina de peptidoglicano (2–7 nm).
- Membrana externa com lipopolissacarídeo (LPS, endotoxina) e porinas.
- Espaço periplasmático entre as duas membranas.
- Ao tratar com álcool, a camada lipídica se dissolve → o complexo é lavado.
- Resistentes à vancomicina (não penetra através da membrana externa).
4. Bactérias Gram+ — principais
| Gênero | Tipo | Forma | Doenças |
|---|---|---|---|
| Staphylococcus | S. aureus | Cachos de cocos | Piodermites, sepse, endocardite, pneumonia |
| Streptococcus | S. pyogenes (BGA) | Cadeias de cocos | Amigdalite, escarlatina, erisipela, glomerulonefrite aguda |
| Streptococcus | S. pneumoniae | Diplococos lanceolados | Pneumonia, meningite, otite |
| Enterococcus | E. faecalis | Diplococos | ITU, endocardite |
| Bacillus | B. anthracis | Bacilos | Carbúnculo (Antraz) |
| Clostridium | C. difficile, tetani, botulinum, perfringens | Bacilos anaeróbios | Colite pseudomembranosa, tétano, botulismo, gangrena gasosa |
| Listeria | L. monocytogenes | Bacilos | Listeriose em gestantes, recém-nascidos |
| Corynebacterium | C. diphtheriae | Bacilos | Difteria |
5. Bactérias Gram-negativas — principais
| Gênero | Representantes | Doenças |
|---|---|---|
| Enterobacteriaceae | E. coli, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Serratia | ITU, sepse, pneumonia, peritonite |
| Salmonella | S. typhi, S. enteritidis | Febre tifoide, salmonelose |
| Shigella | S. dysenteriae e outros | Shigelose |
| Pseudomonas | P. aeruginosa | Infecções nosocomiais, PAV, feridas de queimaduras |
| Acinetobacter | A. baumannii | Nosocomiais, MDR |
| Neisseria | N. meningitidis, N. gonorrhoeae | Meningite, gonorreia |
| Haemophilus | H. influenzae | Epiglotite, meningite, otite |
| Bordetella | B. pertussis | Coqueluche |
| Campylobacter | C. jejuni | Enterite |
| Helicobacter | H. pylori | Gastrite, úlcera, câncer gástrico |
6. "Não coram pelo Gram"
- Micobactérias (M. tuberculosis, M. leprae) — parede cerosa; coloração de Ziehl-Neelsen (BAAR).
- Micoplasmas (M. pneumoniae) — sem parede celular; não visíveis na coloração de Gram.
- Espiroquetas (T. pallidum, Borrelia) — finas, coram-se mal; microscopia de campo escuro, impregnação pela prata.
- Clamídias, riquétsias — parasitas intracelulares.
- Legionella — requer impregnação pela prata ou meios especiais (BCYE).
7. Aplicação clínica
- Escarro — orientação rápida na pneumonia adquirida na comunidade e nosocomial.
- LCR — de emergência na meningite: cocos Gram-positivos — pneumococo; diplococos Gram-negativos — meningococo; bacilos Gram-negativos — H. influenzae.
- Urina — na urossepse; bacilos Gram-negativos — mais frequentemente o grupo entérico.
- Sangue (de frascos de hemocultura) — na sepse.
- Secreção de ferida, pus.
- Esfregaço uretral/cervical — gonorreia (diplococos Gram-negativos no interior de neutrófilos).
8. Antibioticoterapia empírica
- Cocos Gram-positivos no escarro na pneumonia adquirida na comunidade — ceftriaxona ± macrolídeo; pneumococo provável.
- Bacilos Gram-negativos na urina — ceftriaxona, fluorquinolonas.
- Diplococos Gram-positivos no LCR — ceftriaxona + vancomicina (pneumococo, resistência possível).
- Diplococos Gram-negativos no LCR — ceftriaxona (meningococo); isolamento de contatos.
- Flora mista no líquido peritoneal — betalactâmico + anti-anaeróbio (metronidazol) ou carbapenêmico.
- Bacilos Gram-positivos anaeróbios com esporos — suspeitar de infecção por clostrídios.
9. Limitações do método
- Sensibilidade ~60–80% (para uma avaliação confiável, são necessárias ≥ 10⁵ células por campo visual).
- Qualidade da amostra: no escarro — controle pelos critérios (< 10 células epiteliais e > 25 neutrófilos por campo em ×100).
- Não diferencia células viáveis de mortas.
- Não fornece o diagnóstico de espécie (requer cultura + bioquímica + espectrometria de massa MALDI-TOF).
- Não substitui o teste de suscetibilidade a antibióticos — este é determinado apenas após a cultura.
10. Erros no exame
- Excesso de tempo no álcool — falso-negativos (Gram-positivos parecem Gram-negativos).
- Tempo insuficiente — falsos-positivos.
- Culturas velhas — Gram-positivos podem apresentar um padrão gram-variável (devido ao afinamento da parede).
- Esfregaço excessivamente espesso — descoloração deficiente.
- Contaminação — múltiplos morfotipos.
11. Alternativas modernas e complementares
- Cultura com identificação por MALDI-TOF (espectrometria de massa) — diagnóstico de espécie em 15 min.
- Painéis de PCR (Septi-Fast, FilmArray BCID/GI/RP) — detecção rápida de patógenos no sangue, LCR, material respiratório.
- Sequenciamento de 16S rRNA — identificação em caso de cultura negativa.
- Testes de antígeno (pneumocócico, para legionelose na urina).
- A coloração de Gram permanece como o primeiro rastreio devido à velocidade e baixo custo.
12. FAQ
Por que as micobactérias não se coram pelo Gram?
Sua parede celular contém ácidos micólicos de alto peso molecular e cera → a superfície hidrofóbica impede a passagem de corantes aquosos. Utiliza-se a coloração ácido-resistente (Ziehl-Neelsen, fluoróforo auramina).
O que são bactérias gram-variáveis?
Bactérias que apresentam um aspecto diferente sob várias condições: Gram-positivas velhas (afinamento da parede), alguns clostrídios, lísterias. Geralmente correspondem a verdadeiras Gram-positivas.
Por que os bacilos Gram-negativos na urina são mais frequentemente E. coli?
A E. coli é um comensal normal do trato gastrintestinal e a principal causa de ITU adquirida na comunidade (70–80%). Esta é a primeira hipótese ao surgirem bacilos Gram-negativos na urina.
É possível distinguir *S. aureus* e *S. epidermidis* pelo método de Gram?
Não. Ambos são cocos Gram-positivos em cachos. A diferenciação é feita pela coagulase (*S. aureus* +), catalase (ambos +) e perfil bioquímico.
Por que a vancomicina não funciona contra bactérias Gram-negativas?
A vancomicina é uma molécula grande que se liga ao D-Ala-D-Ala no peptidoglicano. As bactérias Gram-negativas possuem uma membrana externa com porinas pequenas, através das quais a vancomicina não consegue penetrar.
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