Tipos de preparados histológicos
Dependiendo del método de preparación, se distinguen cuatro tipos principales de preparados:
- Cortes. Láminas finas de órganos. Es la variante más frecuente en la práctica.
- Frotis. Se emplean para el estudio de fluidos corporales (por ejemplo, sangre o médula ósea).
- Improntas. Se obtienen aplicando un órgano (por ejemplo, el bazo) sobre un portaobjetos.
- Preparados en extensión (totales). Consisten en fragmentos enteros de estructuras delgadas, como el peritoneo o la piamadre.
Algoritmo estándar para la creación de un corte
La creación de un corte histológico es un proceso estrictamente regulado que consta de cinco pasos sucesivos:
- Toma y fijación del material. Se recorta un fragmento del órgano (de unos $0,5 \times 1 \times 1$ cm) y se sumerge en una solución fijadora (formalina, metanol). La fijación dura 24 horas y previene el autolisis (autodigestión) mediante la desnaturalización de proteínas. Tras esto, la muestra se lava con agua.
- Deshidratación y endurecimiento. Para que el tejido adquiera la dureza necesaria para el corte, se impregna en parafina o resinas. Dado que la parafina es hidrófoba, el tejido se deshidrata primero en alcoholes de concentración creciente (del 70% al 100%), y luego el alcohol se desplaza con xilol. A continuación, el material se incluye en parafina líquida (52–56 °C), la cual al enfriarse forma un bloque duro.
- Microtomía (corte). El bloque se fija en el micrótomo. El dispositivo corta capas finas (por ejemplo, de 7 µm), las cuales se extienden en agua tibia y se transfieren a un portaobjetos.
- Tinción. Antes de aplicar el colorante hidrosoluble, es necesario desparafinar el tejido: la parafina se elimina con xilol y el agua se reintroduce mediante el paso por alcoholes de concentración decreciente. Tras la tinción, el preparado se lava con agua.
- Conservación. Para su almacenamiento prolongado, el corte se vuelve a deshidratar y aclarar (con carbolxilol y xilol). Luego se aplica un medio de montaje (frecuentemente bálsamo de Canadá), cuyo índice de refracción es cercano al del vidrio, y se cubre con un cubreobjetos.
Características de otros métodos
Además de los cortes clásicos de parafina, existen otros enfoques:
- Diagnóstico rápido (intraoperatorio). Se emplea durante las cirugías o para histoquímica. La muestra se congela (con nitrógeno líquido o dióxido de carbono) y se corta en un criostato. Esto permite prescindir de la fijación, el paso por alcoholes y la inclusión, obteniendo un resultado inmediato.
- Preparados totales y frotis. En su preparación se omiten las etapas de endurecimiento y corte. El ciclo incluye únicamente la fijación, la tinción y el montaje. A menudo, los frotis se montan utilizando aceite de cedro en lugar de bálsamo de Canadá.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿Qué líquidos fijadores se emplean para la preparación de preparados histológicos?
Para la fijación de preparados histológicos se utilizan líquidos fijadores simples y compuestos que previenen la descomposición y la autolisis de los tejidos. Entre las soluciones utilizadas se encuentran:
- Fijadores simples: formalina, alcohol (metanol), ácidos y sales de metales pesados. Para la fijación específica de grasas y fibras nerviosas mielínicas se utiliza ácido ósmico.
- Fijadores compuestos: consisten en diversas mezclas de líquidos fijadores simples.
¿Qué colorantes se utilizan con más frecuencia para la tinción general de los preparados histológicos?
En las fuentes bibliográficas, la combinación de hematoxilina y eosina se indica como la tinción estándar para preparados histológicos.
- Hematoxilina: colorante básico; las estructuras basófilas se tiñen con colorantes básicos. Estas incluyen los núcleos celulares y los ribosomas, así como el componente amorfo de la sustancia intercelular.
- Eosina: colorante ácido de color rosa brillante; las estructuras oxífilas se tiñen con colorantes ácidos. Estas incluyen las proteínas citoplasmáticas, incluida la hemoglobina de los eritrocitos, y las estructuras extracelulares, como las fibras de colágeno.
Asimismo, las fuentes mencionan otros colorantes: fucsina ácida, azur II, carmín y colorantes neutros; los colorantes neutros son una mezcla de colorantes básicos y ácidos.
¿Qué medios se emplean para el montaje (conservación) de los preparados histológicos?
Para el montaje de preparados histológicos se utilizan medios conservantes; el índice de refracción de la luz de dicho medio debe ser cercano al del vidrio. Las fuentes indican:
- Bálsamo de Canadá: ejemplo de medio conservante para el montaje de un corte bajo un cubreobjetos.
- Glicerina-gelatina y poliestireno: medios conservantes para el montaje de cortes.
- Aceite de cedro: a menudo se utiliza en los frotis en lugar del bálsamo de Canadá.
Preguntas de clases y exámenes
¿Para qué sirve la fijación del material?
La fijación es necesaria para prevenir la autólisis (autodigestión) de los tejidos por las enzimas celulares. Los fijadores provocan la desnaturalización de las proteínas, preservando la estructura vital.
¿Por qué es necesario deshidratar el tejido antes de incluirlo en parafina?
La parafina posee propiedades hidrófobas y no puede penetrar en un tejido que contiene agua. Por lo tanto, el agua se sustituye primero por alcohol y luego por un disolvente intermedio (xilol).
¿En qué consiste el diagnóstico rápido?
Es un método en el cual el tejido se congela rápidamente y se corta en un criostato. Excluye las largas etapas de fijación e inclusión, lo que permite obtener rápidamente un preparado directamente durante la cirugía.
Qué más repasar sobre el tema
- Mecanismos de desnaturalización química de proteínas durante la fijación
- Propiedades de diversos medios de inclusión (celoidina, resinas sintéticas)
- Dispositivo y principio de funcionamiento del micrótomo
- Tipos de colorantes y mecanismos de su interacción con los tejidos
- Algoritmo detallado de los estudios histoquímicos
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