Principios de clasificación
Para poder estudiar los tejidos bajo el microscopio, es necesario contrastarlos. Todas las sustancias colorantes utilizadas en histología se dividen exactamente en cuatro grupos. El criterio principal de esta división es la naturaleza química del propio colorante, así como su afinidad por determinadas estructuras dentro de la célula o en la matriz extracelular. Comprender esta clasificación es la clave para descifrar cualquier preparación histológica.
Colorantes ácidos y oxifilia
Por su naturaleza química, estas sustancias son ácidos, así como sus sales ácidas. La propiedad clave de las estructuras tisulares gracias a la cual se unen a dichas sustancias se denomina oxifilia.
Los representantes típicos de este grupo son la eosina de color rosa brillante y la fucsina ácida. Sus principales «dianas» son las estructuras oxifílicas ricas en grupos químicos básicos:
- Proteínas citoplasmáticas de la mayoría de las células (incluida la hemoglobina contenida en los eritrocitos).
- Estructuras no celulares, principalmente las fibras de colágeno de la sustancia intercelular.
Colorantes básicos y basofilia
Este grupo está representado por sales básicas. La capacidad de los tejidos para unirse a ellas se denomina basofilia. Entre los representantes más conocidos se encuentran el carmín, el azur II y la hematoxilina (siendo el producto de su oxidación —la hemateína— la sustancia colorante activa en este último caso).
Los colorantes básicos se unen selectivamente a estructuras ricas en ácidos orgánicos. Entre estas dianas basófilas se encuentran:
- Núcleos celulares y ribosomas. La tinción se produce debido al alto contenido de ácidos nucleicos (ADN y ARN) en ellos.
- Componente amorfo de la sustancia intercelular. Aquí la reacción se debe a la presencia de ácido hialurónico y otros compuestos similares.
Colorantes neutros e indiferentes
Los colorantes neutros son una mezcla compleja de sustancias colorantes básicas y ácidas. Su principio de acción consiste en teñir simultáneamente diferentes componentes del tejido con sus colores específicos. Las dianas clásicas para ellos (estructuras neutrófilas) son la granulación específica de los leucocitos neutrófilos y el citoplasma de los eritroblastos policromatófilos.
Los colorantes indiferentes difieren radicalmente de los demás. Por su naturaleza, son sustancias hidrófobas y lipófilas que son absolutamente insolubles en agua. Los representantes más conocidos son el Sudán III y el Sudán IV.
Su mecanismo de tinción no se basa en una reacción química con los componentes del tejido, sino en la disolución exclusivamente física del propio colorante en grasas y lípidos. Como resultado de este proceso, las gotas lipídicas adquieren un color naranja brillante intenso, lo que permite identificarlas fácilmente en la preparación.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿En qué se diferencian los colorantes metacromáticos de los ortocromáticos?
Los colorantes metacromáticos se distinguen por su capacidad de cambiar su color original al entrar en contacto con sustancias cromotrópicas, mientras que en estos materiales no se incluye información sobre los colorantes ortocromáticos. El fenómeno de la metacromasia se debe a la alta concentración de glucosaminoglucanos en el tejido. Entre los colorantes metacromáticos se encuentran:
- Azul de toluidina: tiñe la sustancia no de azul, sino de otro color (rojo violáceo).
- Azul de metileno: también provoca el fenómeno de la metacromasia.
¿Qué colorantes histológicos se utilizan para detectar glucógeno?
Para detectar glucógeno se utilizan el reactivo de Schiff (en el marco de la reacción PAS) y el carmín de Best. En la práctica histológica se emplean los siguientes métodos:
- Reactivo de Schiff: se utiliza en la reacción PAS (reacción de Schiff con ácido periódico) tras la oxidación de la preparación con ácido yódico. Los acúmulos de glucógeno se tiñen de color violeta, rojo oscuro o rojo frambuesa oscuro.
- Carmín de Best: se utiliza para la diferenciación específica del glucógeno y proporciona una tinción roja.
Para confirmar la presencia de glucógeno se emplea el control enzimático (tratamiento de los cortes con amilasa).
¿Con qué colorantes se identifican las fibras elásticas?
Las fibras elásticas se identifican mediante tinción con orceína o una combinación de picrofucsina con hematoxilina, ya que con los métodos estándar no presentan contraste. Métodos de tinción:
- Orceína: método selectivo en el cual las fibras y membranas elásticas adquieren un color cereza (o rojo cereza) sobre un fondo rosado pálido del resto de los tejidos.
- Picrofucsina con hematoxilina: método diferencial que tiñe las fibras elásticas de amarillo por la acción del ácido pícrico, las fibras de colágeno de rojo y los núcleos celulares de violeta.
Recordar la basofilia es sencillo: los colorantes BÁSICOs se unen a los ácidos (ADN, ARN en los núcleos). La oxifilia es lo contrario: los colorantes ÁCIDOS tiñen las proteínas y el citoplasma.
Preguntas de clases y exámenes
¿Cuál es la diferencia entre oxifilia y basofilia?
La oxifilia es la capacidad de las estructuras para teñirse con colorantes ácidos (así se tiñen las proteínas citoplasmáticas y el colágeno). La basofilia es la afinidad por los colorantes básicos, característica de las estructuras ricas en ácidos (núcleos, ribosomas, sustancia amorfa).
¿Cuál es el mecanismo de acción de los colorantes indiferentes?
A diferencia de otros grupos, no reaccionan químicamente con el tejido. Los colorantes indiferentes (por ejemplo, el Sudán III) se disuelven físicamente en lípidos y grasas, tiñéndolos de un color naranja brillante.
¿Qué tiñen los colorantes neutros?
Consisten en una mezcla de sustancias ácidas y básicas, tiñendo las estructuras neutrófilas: la granulación específica de los leucocitos neutrófilos y el citoplasma de los eritroblastos policromatófilos.
Qué más repasar sobre el tema
- El proceso de oxidación de la hematoxilina a hemateína
- Tinción de la hemoglobina de los eritrocitos con eosina
- Identificación de fibras de colágeno con fucsina ácida
- Naturaleza química del ácido hialurónico y su basofilia
- Propiedades físico-químicas del Sudán III y del Sudán IV
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