Impregnación con nitrato de plata
Este método se emplea con el fin de visualizar los cuerpos de las células nerviosas (neuronas) y sus prolongaciones. Es importante señalar que la técnica se dirige específicamente a estas estructuras y no a la identificación de las vainas de mielina, las células gliales o las vesículas sinápticas.
El proceso requiere una preparación de muestras específica. En primer lugar, se necesita una fijación prolongada del material en formalina, la cual debe durar al menos siete días. En segundo lugar, para obtener cortes de calidad en el micrótomo de congelación, la muestra se compacta previamente mediante un método de congelación.
Tras la preparación, los cortes se tratan con soluciones de nitrato de plata (o plata amoniacal) seguidas de una reducción. El principio de la tinción radica en que las células y las fibras del sistema nervioso adquieren selectivamente un color negro, mientras que los tejidos circundantes se tiñen en un tono marrón claro contrastante. En la preparación de un corte de médula espinal se distinguen claramente los cuerpos de las células nerviosas con citoplasma oscuro y núcleo más claro, y se contornean nítidamente las prolongaciones neuronales.
Identificación de estructuras basófilas (tinción de Nissl)
Para detectar estructuras específicas dentro de la neurona se aplica la tinción por el método de Nissl, el cual difiere histológicamente de los métodos de Golgi, Weigert o la tinción rutinaria con hematoxilina y eosina. Como reactivo se utiliza el colorante azul de toluidina.
El principio de acción del método se basa en que el colorante se une activamente a compuestos moderadamente basófilos. El objetivo principal es la visualización de los grumos de sustancia basófila, también conocida como tigroide o sustancia de Nissl.
Como resultado de la tinción, estas estructuras adquieren un color azul intenso. Al estudiar una neurona de la médula espinal se puede observar una localización clara de la sustancia basófila: los grumos se encuentran en gran cantidad directamente en el soma neuronal, y también están presentes en algunas de sus prolongaciones, en particular en las dendritas.
Identificación de mielina mediante ácido ósmico
Para el estudio de las fibras nerviosas mielínicas se aplica el método de fijación o impregnación con osmio (ácido ósmico). La vaina de mielina tiene una naturaleza membranosa muy marcada, es decir, lipídica, lo que determina la elección del reactivo. El método no está dirigido a componentes fibrilares, hidrocarbonados o proteicos.
El principio de acción se basa en que el método es estrictamente específico para estructuras ricas en grasas (lípidos). El ácido ósmico tiene la capacidad de disolverse en las gotas lipídicas y en las membranas. Gracias a la propiedad de osmiofilia (la capacidad de unirse al osmio), la vaina de mielina rica en lípidos adquiere un color oscuro, negro.
En el corte transversal de una fibra nerviosa tras dicho tratamiento se visualizan nítidamente dos zonas principales: en la parte central se sitúa el cilindro eje (axón) sin teñir, y en la periferia, la gruesa vaina de mielina de color negro.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿Por qué la sustancia de Nissl (tigroide) está ausente en los axones y en el cono axónico?
La sustancia de Nissl (tigroide) está ausente en el axón y en su base (cono axónico), lo que sirve como un criterio diagnóstico y morfológico importante en microscopía para diferenciar el axón de las dendritas. La causa fisiológica directa de su ausencia no se indica en el texto, sin embargo, se detalla exhaustivamente la naturaleza de estas estructuras.
La sustancia tigroide es el aparato síntesis de proteínas de la neurona. Ultraestructuralmente, cada grumo representa una pila de cisternas aplanadas del retículo endoplásmico rugoso con ribosomas adheridos y libres. La basofilia durante la tinción es proporcionada por el ARN ribosómico.
¿Qué células gliales forman la vaina de mielina en el sistema nervioso central y periférico?
La vaina de mielina está formada por diferentes células gliales según la región del sistema nervioso.
- En el SNC, las vainas de mielina están formadas por oligodendrocitos.
- En el SNP, estas células se denominan lemocitos / neurolemocitos / células de Schwann.
La capa de mielina representa varias capas de membrana de oligodendrocito o lemocito enrolladas concéntricamente alrededor del cilindro eje. Para el lemocito se describe la formación de la capa de mielina mediante la inmersión del cilindro eje en su citoplasma, seguida de un giro repetido del lemocito alrededor de su propio eje.
S-O-N: Plata (Silver) — Silueta de la neurona (soma y prolongaciones negras), Osmio — Vaina (mielina lipídica negra), Nissl — Nucleoproteínas/basofilia (tigroide azul).
Preguntas de clases y exámenes
¿Por qué en la impregnación argéntica el núcleo de la neurona se ve claro?
El método tiñe selectivamente el citoplasma y las prolongaciones de negro debido a la reducción de plata, mientras que el núcleo une menos el metal y permanece claro sobre el fondo del citoplasma oscuro.
¿Dónde se localizan los grumos basófilos con la tinción de Nissl?
Los grumos de sustancia basófila (tigroide) se localizan directamente en el cuerpo de la célula nerviosa y también se extienden hacia las porciones proximales de las dendritas.
¿Por qué mecanismo el ácido ósmico tiñe las fibras mielínicas?
La vaina de mielina tiene naturaleza lipídica. El ácido ósmico se disuelve en los lípidos y, gracias a la propiedad de osmiofilia, la vaina se une al osmio adquiriendo un color negro.
Qué más repasar sobre el tema
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