Característica geral e tipos de reações
Todas as reações sorológicas deste grupo baseiam-se em uma regra estrita: as moléculas do complemento entram em ação apenas quando um anticorpo específico encontra seu antígeno e se liga a ele. Até esse momento, o complemento permanece inativo.
Na prática laboratorial, distinguem-se três tipos principais de tais reações:
- Reação de fixação do complemento (RFC). É a metodologia mais complexa, exigindo um preparo extremamente rigoroso de todos os componentes antes da realização da análise.
- Reação de hemólise radial (RHR). Este método é tecnicamente baseado no processo de difusão de componentes em um gel especial.
- Reação de adesão imune (RIA). É direcionada ao trabalho com grandes antígenos particulados e à avaliação de sua interação com as células.
Mecanismo da reação de fixação do complemento (RFC)
A RFC é um teste em várias etapas. Para sua execução, são necessários dois sistemas independentes de componentes, que são introduzidos na reação sequencialmente.
O primeiro sistema (principal) inclui:
- Antígeno conhecido (Ag);
- Soro do paciente em estudo (que pode ou não conter os anticorpos buscados);
- Complemento exógeno (C).
O segundo sistema (indicador ou hemolítico) é necessário para a visualização dos resultados. Ele consiste em:
- Eritrócitos de carneiro;
- Soro hemolítico (anticorpos específicos produzidos contra eritrócitos de carneiro).
A essência do método consiste na competição pelo complemento entre o sistema principal e o indicador.
Interpretação dos resultados da RFC
O resultado da reação depende de o complemento ter se ligado ou não na primeira etapa aos complexos do soro do paciente. Dois cenários são possíveis:
Cenário A: Reação positiva (paciente doente)
- Na primeira etapa, o soro do paciente contém anticorpos específicos.
- Eles se unem ao antígeno, formando um imunocomplexo estável.
- O complemento adicionado reconhece esse complexo e se fixa firmemente a ele (sendo consumido).
- Quando o sistema hemolítico é adicionado na segunda etapa, não há mais complemento livre na solução.
- Resultado: A hemólise está ausente. Os eritrócitos de carneiro permanecem intactos e simplesmente sedimentam no fundo do tubo de ensaio. O diagnóstico é confirmado.
Cenário B: Reação negativa (paciente saudável)
- O soro de uma pessoa saudável não contém os anticorpos necessários.
- O imunocomplexo não é formado na primeira etapa.
- Todo o complemento adicionado permanece absolutamente livre.
- Após a adição do sistema indicador, o complemento livre ataca os eritrócitos de carneiro sensibilizados.
- Resultado: Ocorre a destruição total dos eritrócitos. Observa-se hemólise acentuada, e o líquido adquire o aspecto de "sangue laca". O diagnóstico não é confirmado.
Reação de adesão imune (RIA)
Esta reação permite visualizar a interação de objetos grandes. Sua essência consiste na ativação do complemento por antígenos particulados, que incluem células bacterianas inteiras ou vírus previamente tratados com soro imune.
Mecanismo passo a passo da RIA:
- Ocorre a formação do complexo primário entre o antígeno particulado e o anticorpo.
- Este complexo ativa o sistema do complemento, o que leva à produção maciça do componente C3b.
- As moléculas de C3b depositam-se na superfície do complexo e passam a desempenhar a função de "cola" biológica.
Resultado: O antígeno particulado, revestido por moléculas de C3b, adere às membranas das células-alvo que possuem os receptores correspondentes. Tais células incluem eritrócitos humanos, plaquetas e macrófagos. Visualmente, ao misturar essas células com os imunocomplexos, observa-se a união delas, que se assemelha a uma reação clássica de aglutinação.
Resumo: perguntas e respostas sobre o tema
Quais classes de imunoglobulinas são capazes de fixar o complemento em reações sorológicas?
As imunoglobulinas das classes IgM e IgG possuem a capacidade de fixar e ativar o sistema do complemento. Entre as imunoglobulinas da classe G, essa função efetora é expressa predominantemente nas subclasses IgG1 e IgG3. A ativação ocorre pela via clássica, quando o componente iniciador C1q se liga ao fragmento Fc desses anticorpos presentes no imunocomplexo "antígeno-anticorpo".
Para o diagnóstico de quais doenças infecciosas a reação de fixação do complemento é aplicada?
A reação de fixação do complemento é aplicada no diagnóstico sorológico de diversas infecções.
Nas fontes citadas, a RFC é indicada para as seguintes doenças e situações:
- Riquettsiose transmitida por carrapato do norte da Ásia — detecção de anticorpos fixadores do complemento; título diagnóstico de 1:40, o estudo também pode ser realizado em soros pareados.
- Febre exantemática de Astracã — diagnóstico sorológico utilizando a RFC; título diagnóstico de 1:40 ou superior.
- Infecção causada por R. prowazekii — diagnóstico sorológico utilizando RFC, TRHA e ELISA.
- Coxielose / febre Q — diagnóstico sorológico utilizando RFC, ELISA e RIFI indireta.
- Sífilis — historicamente aplicada a RFC, reação de Wassermann.
- Febre do dengue — método sorológico com estudo de soros pareados, incluindo a RFC.
- Infecção por rotavírus — a RFC é utilizada como método sorológico para diagnóstico retrospectivo.
- Encefalite transmitida por carrapatos — entre os métodos de estudo sorológico, a RFC é indicada.
Em que tipo exato de gel é realizada a reação de hemólise radial?
A reação de hemólise radial é realizada em gel de ágar. Eritrócitos de carneiro e complemento são introduzidos previamente na composição deste meio. Quando o soro hemolítico é adicionado aos poços, ocorre a difusão radial dos anticorpos, o que leva à destruição dos eritrócitos e à formação de uma zona de hemólise visualmente definível.
O paradoxo da RFC: se NÃO há hemólise (eritrócitos intactos, sedimentados) — a reação é POSITIVA (há anticorpos). Se HÁ hemólise ("sangue laca") — a reação é NEGATIVA (não há anticorpos).
Questões de aulas e exames
Em que caso o sistema do complemento começa a funcionar nas reações sorológicas?
A ativação ocorre exclusivamente no momento em que o complexo específico «antígeno-anticorpo» é formado.
Por que os eritrócitos de carneiro são necessários na RFC?
Eles atuam como parte do sistema indicador. Se o complemento permanecer livre, ele destruirá os eritrócitos de carneiro e veremos a hemólise.
Quais células possuem receptores para o componente C3b?
Receptores específicos para C3b estão presentes na superfície de eritrócitos humanos, plaquetas e macrófagos.
O que representa o fenômeno do "sangue laca" na RFC?
Esta é a manifestação visual da hemólise de eritrócitos de carneiro, que é observada em um resultado de teste negativo quando não há anticorpos no soro.
O que mais estudar sobre o tema
- Regras exatas para preparação e titulação de componentes para a Reação de Fixação do Complemento
- A mecânica da difusión de antígenos e anticorpos em gel na realização da reação de hemólise radial
- O papel dos macrófagos e plaquetas na depuração do organismo de complexos imunes através de receptores C3b
- A especificidade do tratamento de antígenos corpusculares com soros imunes
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