Principios de diagnóstico y toma de muestras
A nivel global, el diagnóstico de laboratorio de la gripe se desarrolla en tres direcciones principales:
- Aislamiento y posterior identificación del propio virus.
- Indicación de antígenos virales o moléculas de ARN directamente en las células.
- Estudio serológico dirigido a la búsqueda de anticuerpos específicos.
Para una detección exitosa del patógeno, es fundamental recolectar correctamente el material clínico. El momento óptimo para la toma de secreción nasofaríngea (en forma de hisopos o lavados) y frotis de impresión de la mucosa nasal son los primeros tres días desde el inicio de la enfermedad. Es precisamente durante este período cuando la concentración de partículas virales en las membranas mucosas alcanza su máximo.
Diagnóstico rápido y método molecular-genético
Si el médico necesita obtener datos preliminares rápidamente, se emplean métodos de diagnóstico rápido. Su objetivo principal son los antígenos virales estructurales en el biomaterial recolectado. Para su visualización y detección, los laboratorios utilizan la inmunofluorescencia (tanto en variante directa como indirecta), así como el ensayo por inmunoabsorción enzimática (ELISA).
El método molecular-genético tiene como objetivo la detección directa del aparato genético del patógeno. Dado que el genoma de este agente infeccioso está representado por una cadena de ARN, la herramienta principal de búsqueda es la reacción en cadena de la polimerasa (RCP) con la etapa de transcripción inversa. Este enfoque permite detectar con altísima precisión el ARN viral en muestras clínicas.
Método virológico («Patrón de referencia»)
El aislamiento clásico del virus se considera el enfoque de referencia, pero también el más complejo. Está estrictamente dividido en tres etapas secuenciales:
- Cultivo (amplificación). Para la multiplicación del virus se necesitan sistemas biológicos vivos. En la práctica de laboratorio se utilizan embriones de pollo en desarrollo, animales de laboratorio o cultivos celulares. Estos últimos incluyen cultivos primarios de células renales de mono, macaco Rhesus o perro.
- Indicación. En esta etapa se confirma el hecho mismo de la multiplicación del virus en el sistema. En los cultivos celulares, la presencia del patógeno se evidencia por el desarrollo del efecto citopático (ECP), la formación de placas específicas o el cambio de color del medio en la «prueba de color». Al utilizar animales, se evalúa por su muerte o por cambios clínico-patomorfológicos característicos. Asimismo, el hecho de la reproducción se confirma por las propiedades del propio virus mediante las reacciones de hemoaglutinación (RHA) y hemadsorción.
- Identificación. El paso final es la determinación de la especie y tipo específico del agente aislado. Este procedimiento se basa en el estudio detallado de su estructura antigénica. Con este fin, se realizan las reacciones de fijación del complemento (RFC), inhibición de la hemoaglutinación (RIHA), neutralización biológica (RNB) y ELISA.
Método serológico
A diferencia de la búsqueda genética o virológica, el método serológico no evalúa al patógeno en sí, sino la reacción del sistema inmunitario del paciente.
El principio fundamental del método consiste en el estudio de sueros sanguíneos pareados. La primera porción de sangre se toma al inicio de la enfermedad y la segunda de 10 a 14 días después. Un criterio estricto para confirmar el diagnóstico es un aumento de al menos cuatro veces en el título de anticuerpos en el segundo suero en comparación con el primero.
Para evaluar el nivel de anticuerpos se emplean diversas reacciones: RIHA, RFC, ELISA y la reacción de neutralización (RN). Debido a la necesidad de esperar prolongadamente la segunda porción de suero, este método no es adecuado para la detección temprana de la enfermedad. Tiene principalmente un valor retrospectivo, permitiendo confirmar de manera fiable el diagnóstico una vez superado el episodio de infección.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿Qué glicoproteínas de superficie del virus de la gripe son los principales antígenos para determinar su subtipo?
Los principales antígenos de superficie del virus de la gripe que determinan su subtipo son la hemaglutinina y la neuraminidasa.
- Hemaglutinina (HA): es responsable de la adsorción y fusión del virus con la célula.
- Neuraminidasa (NA): elimina los residuos de ácido siálico de la hemaglutinina, lo cual es necesario para la manifestación de las propiedades infecciosas.
Estos antígenos protectores varían independientemente el uno del otro. Se conocen un total de 15 subtipos de HA y 9 subtipos de NA, de los cuales H1, H2, H3 y N1, N2 son patógenos estables para el ser humano.
¿Qué especies de animales de laboratorio son más sensibles al virus de la gripe y se utilizan para su aislamiento?
Las fuentes indican que para el aislamiento del virus de la gripe se utilizan animales de laboratorio, aunque no se nombran las especies específicas más sensibles. En 1933, el virus de la gripe humana se aisló por primera vez tras infectar hurones con lavados nasofaríngeos. La multiplicación del virus en animales infectados se detecta por su muerte o por cambios clínico-patomorfológicos.
¿En qué consiste el mecanismo de la reacción de hemadsorción utilizada para la indicación del virus de la gripe?
La reacción de hemadsorción se basa en la alteración de las propiedades superficiales de las células infectadas: las células infectadas por el virus de la gripe adquieren la capacidad de adsorber, es decir, fijar eritrocitos en su membrana. El método permite detectar el virus incluso en ausencia de un efecto citopático visible. Para detectar los virus que han salido de las células al líquido de cultivo, también se puede utilizar la reacción de hemoaglutinación.
La regla de los «cuatros» para la serología: el diagnóstico se confirma únicamente con un aumento de cuatro veces en el título de anticuerpos en sueros pareados, los cuales se toman con un intervalo de aproximadamente 14 (número que termina en 4) días.
Preguntas de clases y exámenes
¿Por qué no se utiliza el método serológico para el diagnóstico de urgencia?
Porque requiere sueros pareados con un intervalo de toma de 10 a 14 días. Este método está diseñado para la confirmación retrospectiva del diagnóstico cuando el paciente ya se está recuperando.
¿Cómo se demuestra el hecho de la multiplicación del virus en un cultivo celular?
Esto se determina en la etapa de indicación mediante el desarrollo del efecto citopático, la aparición de placas, cambios en la «prueba de color», así como mediante las reacciones de hemoaglutinación (RHA) y hemadsorción.
¿Qué material biológico es mejor tomar para la búsqueda de ARN viral?
Es óptimo utilizar secreción nasofaríngea (lavado o hisopo) y frotis de impresión de la mucosa nasal, recolectados en los primeros 3 días desde el inicio de la enfermedad.
Qué más repasar sobre el tema
- Mecanismo de realización de la RT-PCR
- Principios de lectura de los resultados de las reacciones de hemoaglutinación (RHA) y hemadsorción
- Características del cultivo de virus en embriones de pollo
- Estructura antigénica de los virus y su papel en la etapa de identificación
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