Característica general y variantes del método
Dependiendo del microorganismo específico que se necesite encontrar, el método de cultivo se divide en varias ramas:
- Bacteriológico: búsqueda de bacterias.
- Virológico: búsqueda de virus.
- Micológico: búsqueda de hongos.
- Parasitológico: búsqueda de protozoos.
La principal ventaja de este enfoque es su alta informatividad. Gracias a la capacidad de acumular suficiente biomasa de microorganismos, el laboratorio puede identificar con la mayor precisión posible la especie del agente patógeno. Sin embargo, el método tiene desventajas: requiere un esfuerzo considerable y una espera prolongada de los resultados.
A veces el estudio arroja un resultado falso negativo. Esto ocurre por tres razones principales: el agente patógeno no llegó físicamente a la muestra durante la toma de material, el microbio murió durante el transporte al laboratorio, o el organismo presenta formas específicas no cultivables de microorganismos.
Método bacteriológico: el estándar de oro
El estudio bacteriológico está reconocido oficialmente como el «estándar de oro» del diagnóstico de laboratorio de las infecciones bacterianas. Su tarea clave es aislar un cultivo puro e identificarlo.
La identificación se realiza según un complejo de propiedades:
- Morfológicas y tintoriales (afinidad tintorial).
- Culturales (características de crecimiento en medios).
- Bioquímicas, toxigénicas y antigénicas.
La importancia clínica del método es enorme. Permite elaborar un antibiograma (determinar la sensibilidad a los fármacos) y comprobar la reacción de los microbios a los bacteriófagos. También es importante la evaluación cuantitativa de las bacterias: es la que ayuda a demostrar el papel etiológico del microorganismo, es decir, a confirmar que es la causa de la enfermedad y no un componente transitorio incidental.
La importancia epidemiológica del método radica en la marcación epidemiológica: la determinación de la fuente de infección. Para ello, se realiza la identificación intraespecífica, dividiendo las bacterias de una misma especie en variantes menores: fagovares, biovares, serovares, quemovares y antibioticovares.
Método virológico
Es un proceso complejo y sumamente prolongado que requiere la disponibilidad de un laboratorio especializado. El estudio toma más de 7 días y consta de tres etapas.
Etapa 1: Inoculación (cultivo). Los virus no crecen en agar común, por lo que para ellos se utilizan modelos biológicos susceptibles: animales de laboratorio, embriones de pollo o cultivos de células vivas.
Etapa 2: Inducción del virus. Los especialistas deben detectar el hecho de la multiplicación del agente patógeno. Al utilizar animales, se evalúa el cuadro clínico y los cambios anatomopatológicos de los órganos. En el cultivo celular, la multiplicación del virus se confirma mediante los siguientes signos:
- Efecto citopático (ECP) — daño y muerte celular.
- Formación de inclusiones intracelulares.
- Hemadsorción — adhesión de eritrocitos a las células infectadas.
- Fenómeno de formación de placas — aparición de manchas «estériles» en la monocapa celular.
- Cambio de color del indicador del medio de cultivo (la denominada prueba de color).
Etapa 3: Identificación del virus. Para determinar la especie exacta se utilizan reacciones inmunitarias (HA, IHA, IN, FCF, ELISA) y métodos moleculares y genéticos (principalmente PCR).
Métodos micológico y parasitológico
Para el diagnóstico de las micosis se emplea el método micológico. El material en estudio se siembra en medios especiales. Una vez que se logra aislar un cultivo puro del hongo, este se identifica según tres grupos de propiedades: morfológicas, culturales y bioquímicas. Una etapa obligatoria es la determinación de la sensibilidad del hongo aislado a los antimicóticos (fármacos antifúngicos).
El método parasitológico se basa en el cultivo de protozoos en medios de cultivo con su posterior identificación. Es importante señalar que en la práctica clínica rutinaria este enfoque se utiliza raramente.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿Qué medios de cultivo específicos se utilizan para aislar un cultivo puro de hongos?
Para aislar un cultivo puro de hongos se utilizan medios de cultivo especiales y comunes. Entre los medios específicos se encuentran:
- Medio de Sabouraud — se utiliza en forma de agar o medio líquido.
- Agar mosto — se utiliza para la siembra de material clínico, incluso en el diagnóstico de la candidiasis.
- Mosto líquido — se utiliza para el cultivo de hongos en laboratorio.
- Medio de Czapek — se utiliza para el cultivo de hongos en laboratorio.
¿En qué grupos se clasifican los medios de cultivo para el cultivo bacteriológico?
Los medios de cultivo se clasifican según su composición y propósito. Se distinguen:
- Medios simples.
- Medios complejos.
- Medios electivos (selectivos) — inhiben el crecimiento de la microflora concomitante.
- Medios de enriquecimiento (acumulativos).
- Medios diferencial-diagnósticos — destinados a estudiar la actividad enzimática de las bacterias.
- Medios combinados — combinan las propiedades de los medios electivos y diferencial-diagnósticos.
- Medios para subcultivo.
¿Qué métodos se utilizan para determinar la sensibilidad de las bacterias a los antibióticos al elaborar un antibiograma?
Para determinar la sensibilidad de las bacterias a los antibióticos y elaborar un antibiograma se emplea:
- Método de difusión en disco — se basa en la difusión del antibiótico desde un disco de papel hacia el agar con la formación de una zona de inhibición del crecimiento bacteriano.
- E-test (difusión por gradiente) — utiliza una tira con un gradiente de concentraciones del fármaco; a partir de ella se determina la concentración inhibitoria mínima (CIM).
- Método de diluciones seriadas — permite determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración bactericida mínima (CBM) en medios líquidos.
- Sistemas de pruebas — se emplean para determinar concentraciones límite o CIM.
¿Qué tipos de efecto citopático (ECP) de los virus se pueden observar en un cultivo celular infectado?
En un cultivo celular infectado se pueden observar:
- Efecto citopático.
- Formación de inclusiones intracelulares.
- Hemadsorción: adhesión de eritrocitos a las células infectadas.
- Fenómeno de formación de placas: formación de manchas «estériles» en la monocapa celular.
- Formación de sincitios, en particular, en células de mosquito durante el cultivo de flavivirus.
- Cambio de color del indicador del medio de cultivo.
Para recordar los signos de indicación viral en un cultivo celular, utilice la sigla EIC-HCF: Efecto citopático, Inclusiones, Clacas, Hemadsorción, F Prueba de cambio de color (colorimétrica).
Preguntas de clases y exámenes
¿Por qué el método de cultivo puede dar un resultado falso negativo?
Esto ocurre si el microorganismo estaba ausente en el sitio de toma de la muestra biológica, si murió durante la etapa de transporte al laboratorio o si el patógeno pertenece a formas microbianas no cultivables.
¿Por qué es necesario determinar la cantidad de bacterias al realizar un cultivo?
La evaluación cuantitativa ayuda a comprender el verdadero papel etiológico del microbio. Esto permite diferenciar al agente causal real del proceso infeccioso de las bacterias que simplemente están presentes en el organismo.
¿Qué es la identificación infraespecífica y para qué sirve?
Se trata de la marcación epidemiológica: la división de bacterias de una misma especie en variantes menores (serovares, fagovares, biovares). Esto es de importancia crítica para establecer con precisión la fuente de la infección en las investigaciones epidemiológicas.
¿En qué se diferencia el cultivo de virus del de bacterias?
A diferencia de las bacterias, los virus no se pueden cultivar en medios de cultivo artificiales. Para su cultivo se requieren obligatoriamente modelos biológicos vivos: cultivos celulares, embriones de pollo o animales de laboratorio.
Qué más repasar sobre el tema
- Métodos de tinción bacteriana y propiedades tintoriales de los microorganismos
- Reglas para la realización e interpretación del antibiograma
- Reacciones serológicas para la identificación de virus (IHA, Fijación del Complemento, ELISA)
- Efecto citopático de los virus: tipos y mecanismos de desarrollo
- Características de los medios de cultivo para el crecimiento de hongos
Estudie el tema completo en el curso de «Microbiología»
Aquí tienes un resumen. En el curso encontrarás todo lo que preguntan en clase y en el examen.
- Guía metodológica completa sobre el tema «Método diagnóstico de cultivo» y otras 4 383 páginas de la asignatura
- Ejercicios y pruebas después de cada tema, igual que en el examen práctico
- El tutor de IA responderá a tus preguntas sobre el tema en cualquier momento
- 141 videotutoriales de la asignatura
Otros temas de la sección «Diagnóstico microbiológico»
Videoclases gratuitas: microbiologíaLecciones breves con resúmenes, sin registro.
Material preparado por los profesores de WhiteCoat Pro según el plan de estudios de las facultades de medicina. De carácter educativo.