Método microscópico de diagnóstico

Característica geral do método microscópico

A essência desta abordagem consiste na investigação visual direta da amostra coletada utilizando diversos equipamentos de ampliação. Dependendo dos objetivos do estudo e do tipo de microrganismo, diferentes tipos de microscopia podem ser utilizados:

• Microscopia óptica (a opção mais comum e rotineira).
• Microscopia de contraste de fase.
• Microscopia de campo escuro.
• Microscopia de fluorescência.
• Microscopia eletrônica.

As principais tarefas do método microscópico são constatar a presença ou a ausência total de microrganismos na amostra clínica, bem como determinar detalhadamente os traços morfológicos do agente patogênico identificado.

Esta abordagem apresenta vantagens óbvias. Em primeiro lugar, destacam-se a simplicidade de execução e a economicidade. Além disso, o método caracteriza-se pela rapidez, tornando-o indispensável para o diagnóstico rápido (o resultado pode ser obtido no mesmo dia). Contudo, há também desvantagens sérias. Entre as causas de frequentes erros diagnósticos estão a subjetividade na avaliação do esfregaço pelo médico laboratorista e o alto risco de resultados falso-negativos caso a concentração do patógeno no material seja muito baixa.

Método bacterioscópico

A bacterioscopia visa ao diagnóstico de infecções bacterianas. Sua essência consiste na coloração prévia das células bacterianas para o estudo subsequente de suas propriedades morfológicas e tinctoriais (ou seja, a capacidade das estruturas celulares de absorver diferentes corantes).

Durante o estudo, o laboratorista avalia a forma das células, seu tamanho exato e a disposição mútua característica. Por exemplo, as bactérias podem dispor-se em cadeias (típico dos estreptococos), em forma de «cachos de uva» (estafilococos) ou em pares (diplococos).

Para identificar estruturas específicas do microrganismo, são aplicados métodos de coloração específicos:

• Método de Gram: método principal que permite avaliar as propriedades da parede celular.
• Método de Burri-Gins: utilizado para detectar a presença de cápsula.
• Método de Aujeszky: auxilia na detecção de esporos bacterianos.
• Impregnação por prata de Morozov e coloração de Loeffler: destinam-se à visualização de flagelos.
• Método de Neisser: aplicado para detectar grânulos de volutina.

Limitações do método: A bacterioscopia possui um alto limiar de sensibilidade (exige concentração de 1 mil a 100 mil células por mililitro) e baixa especificidade (cerca de 20–80%). Devido à semelhança morfológica de muitas bactérias, o resultado muitas vezes tem caráter apenas orientativo.

No entanto, o método é confiável se o micróbio possuir morfologia única e o paciente apresentar um quadro clínico característico. Ótimos exemplos de aplicação eficaz são o diagnóstico de tuberculose (busca de bacilos álcool-ácido resistentes), gonorreia (detecção de diplococos intracelulares em neutrófilos no exsudato purulento) e leptospirose (busca de micróbios espiralados em campo escuro nos estágios iniciais da doença).

Método viroscópico

A viroscopia requer instrumentação completamente diferente. A principal ferramenta aqui é a microscopia eletrônica, sendo a microscopia de fluorescência empregada com muito menos frequência. A microscopia óptica na virologia de rotina praticamente não é utilizada, pois os vírus têm dimensões nanométricas e não são visíveis ao microscópio comum.

Há poucas exceções a esta regra. Com a ajuda de um microscópio óptico, é possível detectar:

1. Vírus grandes (com mais de 200 nm de tamanho). Por exemplo, o agente causador da varíola pode ser visualizado utilizando o método de impregnação por prata de Morozov.
2. Sinais indiretos de lesão viral. Estes incluem manifestações de efeito citopático nas células, bem como inclusões intracelulares específicas (intranucleares ou intracitoplasmáticas), que se formam nos tecidos infectados.

Diagnóstico microscópico de parasitas e fungos

A microscopia é considerada o método mais eficaz e confiável na suspeita de doenças parasitárias. Os objetos de estudo aqui são os protozoários e vários helmintos.

O método parasitoscópico baseia-se no fato de que esses patógenos possuem grandes dimensões e morfologia muito característica. Esta é a principal maneira de confirmar diagnósticos como malária, amebíase, giardíase e várias helmintíases. Tecnicamente, o estudo inclui a preparação de exames a fresco (nativos), bem como esfregaços com coloração subsequente pelo método de Romanowsky-Giemsa.

A microscopia de fungos tem suas particularidades. As preparações são examinadas tanto em estado nativo quanto corado. Em micoses profundas, o método histológico é frequentemente aplicado. Seu objetivo é encontrar elementos fúngicos (como hifas e esporos) diretamente nos tecidos ou órgãos afetados do paciente. Para isso, cortes finos ou ultracfinos são preparados a partir das biópsias obtidas, submetidos a coloração especial (por meio de métodos histoquímicos) e examinados ao microscópio óptico.

Questões de aulas e exames

O que mais estudar sobre o tema

• Técnica e mecanismo bioquímico da coloração de Gram em bactérias
• Princípios de funcionamento dos microscópios de contraste de fase e de campo escuro
• Tipos de efeito citopático dos vírus em culturas celulares
• Particularidades da coloração histoquímica de preparações em micoses sistêmicas
• Classificação morfológica de bactérias: cocos, bacilos, formas espiraladas

Outros tópicos da seção «Diagnóstico microbiológico»

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