Principes de classification
Pour étudier les tissus au microscope, il est nécessaire de les contraster. Toutes les substances colorantes utilisées en histologie se divisent exactement en quatre groupes. Le principal critère de cette division est la nature chimique du colorant lui-même, ainsi que son affinité pour des structures spécifiques à l'intérieur de la cellule ou dans la matrice extracellulaire. Comprendre cette classification est la clé pour déchiffrer n'importe quelle préparation histologique.
Colorants acides et oxyphilie
De par leur nature chimique, ces substances sont des acides ainsi que leurs sels acides. La propriété clé des structures tissulaires grâce à laquelle elles se lient à ces substances est appelée oxyphilie.
Les représentants typiques de ce groupe sont l'éosine rose vif et la fuchsine acide. Leurs principales « cibles » sont les structures oxyphiles riches en groupes chimiques basiques :
- Protéines cytoplasmiques de la plupart des cellules (y compris l'hémoglobine contenue dans les érythrocytes).
- Structures non cellulaires, en premier lieu les fibres de collagène de la substance intercellulaire.
Colorants basiques et basophilie
Ce groupe est représenté par des sels basiques. La capacité des tissus à se lier à eux est appelée basophilie. Parmi les représentants les plus connus, on peut citer le carmin, l'azur II et l'hématoxyline (la substance active colorante dans ce dernier cas étant le produit de son oxydation, l'hématéine).
Les colorants basiques se lient sélectivement aux structures riches en acides organiques. Ces cibles basophiles comprennent :
- Nois cellulaires et ribosomes. La coloration est due à leur haute teneur en acides nucléiques (ADN et ARN).
- Composant amorphe de la substance intercellulaire. Ici, la réaction est due à la présence d'acide hyaluronique et d'autres composés similaires.
Colorants neutres et indifférents
Les colorants neutres représentent un mélange complexe de substances colorantes basiques et acides. Leur principe d'action consiste à colorer simultanément différents composants du tissu dans leurs couleurs spécifiques. Les cibles classiques pour eux (structures neutrophiles) sont la granulation spécifique des leucocytes neutrophiles et le cytoplasme des érythroblastes polychromatophiles.
Les colorants indifférents se distinguent radicalement des autres. Par nature, ce sont des substances hydrophobes et lipophiles, absolument insolubles dans l'eau. Les représentants les plus connus sont le Soudan III et le Soudan IV.
Leur mécanisme de coloration ne repose pas sur une réaction chimique avec les composants du tissu, mais sur une dissolution purement physique du colorant lui-même dans les graisses et les lipides. En conséquence de ce processus, les gouttelettes lipidiques acquièrent une couleur orange vif intense, ce qui permet de les identifier facilement sur la préparation.
En bref : réponses aux questions sur le sujet
En quoi les colorants métachromatiques diffèrent-ils des colorants orthochromatiques ?
Les colorants métachromatiques se distinguent par leur capacité à modifier leur couleur initiale au contact de substances chromotropes, tandis que les informations sur les colorants orthochromatiques sont absentes dans ces documents. Le phénomène de métachromasie est dû à une forte concentration de glycosaminoglycanes dans le tissu. Les colorants métachromatiques comprennent :
- Le bleu de toluidine — colore la substance non pas en bleu, mais en une autre couleur (violet-rouge).
- Le bleu de méthylène — provoque également le phénomène de métachromasie.
Quels colorants histologiques sont utilisés pour mettre en évidence le glycogène ?
Pour mettre en évidence le glycogène, on utilise la fuchsine de Schiff (dans le cadre de la réaction PAS) et le carmin de Best. En pratique histologique, les méthodes suivantes sont employées :
- La fuchsine de Schiff — est utilisée lors de la réaction PAS (réaction de Schiff) après oxydation de la préparation par l'acide periodique. Les amas de glycogène sont colorés en violet, rouge foncé ou pourpre foncé.
- Le carmin de Best — est utilisé pour la différenciation spécifique du glycogène et donne une coloration rouge.
Pour confirmer la présence de glycogène, on applique un contrôle enzymatique (traitement des coupes par l'amylase).
Par quels colorants met-on en évidence les fibres élastiques ?
Les fibres élastiques sont mises en évidence à l'aide d'une coloration à l'orcéine ou par une combinaison de picrofuchsine et d'hématoxyline, car elles ne sont pas contrastées par les méthodes standard. Méthodes de coloration :
- L'orcéine — méthode sélective où les fibres élastiques et les membranes acquièrent une couleur cerise (ou rouge cerise) sur un fond rose pâle des autres tissus.
- La picrofuchsine avec l'hématoxyline — méthode différentielle qui colore les fibres élastiques en jaune sous l'action de l'acide picrique, les fibres de collagène en rouge et les noyaux cellulaires en violet.
Il est simple de retenir la basophilie : les colorants BASIQUES se lient aux acides (ADN, ARN dans les noyaux). L'oxyphilie, c'est l'inverse : les colorants ACIDES colorent les protéines et le cytoplasme.
Questions des cours et des examens
Quelle est la différence entre l'oxyphilie et la basophilie ?
L'oxyphilie est la capacité des structures à se colorer par des colorants acides (c'est ainsi que se colorent les protéines cytoplasmiques et le collagène). La basophilie est l'affinité pour les colorants basiques, caractéristique des structures riches en acides (noyaux, ribosomes, substance amorphe).
Quel est le mécanisme d'action des colorants indifférents ?
Contrairement aux autres groupes, ils ne réagissent pas chimiquement avec le tissu. Les colorants indifférents (par exemple, le Soudan III) se dissolvent physiquement dans les lipides et les graisses, les colorant en orange vif.
Que colorent les colorants neutres ?
Ils sont constitués d'un mélange de substances acides et basiques, colorant les structures neutrophiles : la granulation spécifique des leucocytes neutrophiles et le cytoplasme des érythroblastes polychromatophiles.
À étudier également sur le sujet
- Le processus d'oxydation de l'hématoxyline en hématéine
- La coloration de l'hémoglobine des érythrocytes par l'éosine
- La mise en évidence des fibres de collagène par la fuchsine acide
- La nature chimique de l'acide hyaluronique et sa basophilie
- Les propriétés physico-chimiques du Soudan III et du Soudan IV
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