Mecanismo de la reacción
La esencia de la reacción radica en la formación de una red tridimensional (reticulado) a partir de antígenos y anticuerpos. Los anticuerpos actúan como una especie de «puentes» que conectan entre sí los antígenos corpusculares.
La magnitud de la aglutinación depende de la clase de inmunoglobulinas participantes:
- Las IgM poseen una estructura pentamérica, gracias a la cual pueden capturar simultáneamente una gran cantidad de bacterias o células, formando grandes cúmulos.
- Las IgG se presentan como monómeros, por lo que solo unen células adyacentes, construyendo también una red.
Tipos de diagnosticadores
Dependiendo del antígeno que se deba detectar, en las reacciones se emplean diferentes tipos de diagnosticadores (suspensiones microbianas):
- O-diagnosticador: se prepara a partir de bacterias muertas por calor. En este proceso se conserva el antígeno O somático termoestable. La reacción con este diagnosticador produce una aglutinación fino-granular.
- H-diagnosticador: se elabora a partir de bacterias muertas con formalina. En este caso se conserva el antígeno H flagelar termolábil. La aglutinación tiene un carácter floca, en grandes copos, y ocurre con mayor rapidez que la O-aglutinación.
Significado clínico
La reacción de aglutinación se utiliza ampliamente en la práctica médica:
- Serodiagnóstico. Permite determinar de forma cuantitativa el título de anticuerpos antimicrobianos específicos en el suero sanguíneo del paciente.
- Identificación del patógeno (serotipificación). Mediante sueros diagnósticos conocidos, es posible establecer con precisión la especie de las bacterias aisladas del paciente.
- Inmunohematología. Se emplea para la determinación de grupos sanguíneos utilizando anticuerpos monoclonales contra aluantiígenos eritrocitarios.
Reacción de aglutinación en tubo
Este método de ensayo en tubos de ensayo se aplica para el recuento preciso de anticuerpos.
Etapas del procedimiento:
- Se prepara una serie de diluciones seriadas del suero sanguíneo.
- Se añade una cantidad idéntica de diagnosticador (suspensión de microbios muertos) a todos los tubos de ensayo.
- La mezcla se incuba durante varias horas a una temperatura de 37 °C.
Como resultado, se determina el título del suero: la dilución máxima en la que todavía es visible la formación de sedimento (aglutinación).
Reacciones cruzadas
Durante la serotipificación puede surgir un problema: los microorganismos estrechamente emparentados suelen compartir antígenos comunes. Esto conduce a resultados falsos positivos; un mismo suero aglutina diferentes bacterias.
Para resolver este problema, el método de Castellani (1902) propone utilizar sueros aglutinantes absorbidos. Del suero convencional se eliminan todos los anticuerpos de reacción cruzada precipitándolos con bacterias afines. Después de esto, en el suero solo quedan anticuerpos específicos que reaccionan estrictamente contra un patógeno determinado.
En resumen: respuestas a preguntas sobre el tema
¿Qué tipos de reacción de aglutinación existen según el método de realización, además de la reacción en tubo?
Además de la reacción en tubo, se distinguen la reacción orientativa (en portaobjetos), la reacción indirecta y otras modificaciones. La reacción orientativa se realiza mezclando una gota de suero y un cultivo puro del patógeno en un portaobjetos.
¿Qué es la reacción de hemoaglutinación indirecta (pasiva) (RHI)?
La reacción de hemoaglutinación indirecta (pasiva) se basa en el uso de eritrocitos como soportes para visualizar la interacción entre antígeno y anticuerpo. En la variante clásica para la búsqueda de anticuerpos, se emplea un diagnosticador eritrocitario antigénico, compuesto por eritrocitos con antígenos conocidos. En la reacción de hemoaglutinación indirecta inversa, para la búsqueda de antígenos se utiliza un diagnosticador eritrocitario con anticuerpos conocidos.
¿Qué condiciones físico-químicas del medio son necesarias para el desarrollo óptimo de la reacción de aglutinación?
Para el desarrollo óptimo de la reacción de aglutinación es imprescindible la presencia de electrolitos, tales como una solución isotónica de cloruro de sodio, así como el mantenimiento de un valor de pH óptimo en el medio.
Preguntas de clases y exámenes
¿Qué es el título de un suero?
Es la dilución máxima del suero sanguíneo del paciente en la cual todavía se determina visualmente el sedimento en la reacción de aglutinación en tubo.
¿Para qué sirven los sueros adsorbidos?
Son necesarios para excluir reacciones cruzadas con bacterias emparentadas que poseen antígenos comunes. En dichos sueros se conservan únicamente los anticuerpos específicos dirigidos contra el patógeno deseado.
Qué más repasar sobre el tema
- Reacción de aglutinación orientativa en portaobjetos
- Reacción de aglutinación indirecta
- Métodos de inmunofluorescencia, ELISA y RIA (resumen)
- Anticuerpos monoclonales en inmunohematología
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